細(xì)菌

TE氯化銫溴化乙錠NaCl乙醇CTAB

離心機(jī)搖床

1.  培養(yǎng)5 ml 的細(xì)菌培養(yǎng)物至飽和狀態(tài)，取1.5 ml 的培養(yǎng)物離心2 min。

2.  沉淀物加入567 μl 的TE緩沖液，用吸管反復(fù)吹打使之重懸。

3.  加入30 μl10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混勻，于37℃溫育1 h。

4.  加入100 μl 5 mol/l NaCl充分混勻，再加入80 μlCTAB/NaCl溶液，混勻，于65℃溫育10 min。

5.  加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，離心4~5 min將上清液轉(zhuǎn)人一個新管中，如果難以移出上清，先用牙簽除去界面物質(zhì)。

6.  加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)入一只新管中。

7.  加入0.6體積異丙醇，輕輕混合直到DNA沉淀下來，用一個封口的巴斯德管將沉淀轉(zhuǎn)移至1 ml 的70%乙醇中洗滌。

8.  離心5 min，棄上清，用凍干機(jī)稍加干燥，重溶于的下100 μl TE緩沖液，每次酶切反應(yīng)用10~15 μl。