SPRi技術(shù)檢測(cè)生物分子相互作用時(shí)，對(duì)小分子檢測(cè)有較大需求（分子量<1000 Da）。本文展示的技術(shù)可以檢測(cè)的分子量低至244 Da。
引言
本實(shí)驗(yàn)選擇的模型為鏈酶親和素與*的相互作用。鏈酶親和素結(jié)合到吡咯分子上經(jīng)電共聚合到生物芯片的金表面。然后，*通過與鏈酶親和素間的強(qiáng)親和力被捕捉到生物芯片上。
材料與方法
1. 生物芯片功能化
吡咯-鏈酶親和素和吡咯-小鼠IgG的制備與固定
室溫下，鏈酶親和素與吡咯-NHS在磷酸鹽緩沖液中結(jié)合2 h。反應(yīng)后，在含50 mM PO4、50 mM NaCl和10%*的磷酸緩沖液中使吡咯-鏈酶親和素結(jié)合物脫鹽。
小鼠IgG與吡咯-NHS的結(jié)合與上述方法相同，并用作陰性對(duì)照。
點(diǎn)樣溶液（含10%苷油的磷酸鹽緩沖液）包含20 mM的自由吡咯和濃度為12 mM、8 mM和4 mM的鏈酶親和素或小鼠IgG抗體。這些生物分子通過電化學(xué)過程固定在生物芯片表面。電聚合過程中，工作電極（棱鏡金表面）和對(duì)電極（點(diǎn)樣針）間生成電脈沖（2 V，100 ms）。每次點(diǎn)樣后，針尖用蒸餾水沖洗。點(diǎn)樣后的生物芯片表面見圖1。
圖1： 點(diǎn)樣后生物芯片表面
2. SPRi 實(shí)驗(yàn)
生物芯片功能化后，放入SPRi分析儀，流動(dòng)相為10 mM PBS。
3. 注射溶液
用與流動(dòng)相（10 mM PBS）相同的緩沖溶液將*稀釋為20 ng/mL后注入流動(dòng)池中，即可在無標(biāo)記狀態(tài)下實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)這些點(diǎn)陣上的相互作用。
結(jié)果與討論
1. 固定在生物芯片上小分子的SPRi定量
圖2表示20 ng/mL*進(jìn)樣過程中，鏈酶親和素陣列點(diǎn)上的動(dòng)力學(xué)曲線。從圖中可以看出，無論鏈酶親和素的濃度如何，它與進(jìn)樣的*間的特異性反應(yīng)都可被觀測(cè)到。而無論小鼠IgG的濃度如何都沒有顯著的反應(yīng)。
8 mM鏈酶親和素比其他濃度（4 mM和12 mM）的鏈酶親和素檢測(cè)更加靈敏，而同濃度的小鼠IgG僅能檢測(cè)到背景。
圖2 *進(jìn)樣后鏈酶親和素斑點(diǎn)和小鼠IgG斑點(diǎn)的動(dòng)力學(xué)曲線
2. 蛋白質(zhì)的量與進(jìn)樣次數(shù)的對(duì)比
圖3所示的柱狀圖代表結(jié)合到鏈酶親和素和小鼠IgG陣列點(diǎn)上的*量。
鏈酶親和素陣列點(diǎn)上*的量從25 pg/mm2到32pg/mm2變化，即每點(diǎn)在19.5 pg和25 pg之間（陣列點(diǎn)直徑=500 mm）。鏈酶親和素的*點(diǎn)樣濃度為8 mM。
圖3 *（0.02 mg/mL）進(jìn)樣后鏈酶親和素和小鼠IgG 陣列點(diǎn)上*的量
結(jié)論
Horiba Scientific開發(fā)的SPRi技術(shù)*適合小分子的檢測(cè)，如分子量低于500 Da的*。*被吡咯-鏈酶親和素陣列點(diǎn)特異性的捕捉顯示了我們SPRi儀器的高靈敏度。
