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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞；WI38/VA13的報(bào)價(jià)，咨詢(xún)，稱(chēng)技術(shù)服務(wù)，咨詢(xún)選購(gòu)。
細(xì)胞名稱(chēng)     SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞；WI38/VA13        
形態(tài)特性      上皮細(xì)胞樣        
生長(zhǎng)特性     貼壁生長(zhǎng)        
特征特性      該細(xì)胞1964年建系，源自3個(gè)月胎齡的女性胚胎的肺成纖維細(xì)胞，經(jīng)SV-40轉(zhuǎn)化。         
培養(yǎng)條件      MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS        
傳代方法      1:2～1:10傳代，每周換液2次        
傳代情況     C2        
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS        
支原體檢測(cè)     培養(yǎng)法（-）        
STR             
同工酶             
染色體      45～89        
使用權(quán)限     A類(lèi)
培養(yǎng)需要滿(mǎn)足以下條件
1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。

2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。

PRMT5     cDNA    Human    人 PRMT5 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CDK2     cDNA    Human    人 CDK2 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
IL21     cDNA    Human    人 IL21 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
RTN4R     cDNA    Human    人 RTN4R / NOGOR 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IL15     cDNA    Human    人 IL15 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD40LG     cDNA    Human    人 CD40L / TNFSF5 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CD34     cDNA    Human    人 CD34 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
PTPRC     cDNA    Human    人 CD45 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
SMAD1     cDNA    Mouse    小鼠 Smad1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
TCN2     cDNA    Mouse    小鼠 TCN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
ACVRL1     cDNA    Mouse    小鼠 ALK-1 / ACVRL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IL6     cDNA    Mouse    小鼠 IL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
IL6     cDNA    Mouse    小鼠 IL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
BMPR1A     cDNA    Mouse    小鼠 ALK-3 / BMPRIA 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
TMPRSS2     cDNA    Human    人 TMPRSS2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IL12RB1     cDNA    Human    人 IL12RB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
PRKD2     cDNA    Human    人 PRKD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
WHSC1     cDNA    Human    人 WHSC1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
APP     cDNA    Human    人 APP / PN2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CFD     cDNA    Human    人 CFD 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽