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細(xì)胞名稱  人胚腎293細(xì)胞；HIK293ar  
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣  
生長特性  貼壁生長  
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。   
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS  
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次  
傳代情況  C2  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　  
支原體檢測  陰性　  
STR    
同工酶    
染色體    
使用權(quán)限  未定培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述：  
    肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞是一種多功能細(xì)胞，尤其在肺的非呼吸功能方面更具特殊意義。當(dāng)其受損，肺血管通透性升高導(dǎo)致肺水腫，在成年人呼吸窘迫綜合癥發(fā)生機(jī)制中具有重要意義。但是處于體內(nèi)多素共同作用的復(fù)雜環(huán)境中，對肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和代謝以及病變發(fā)生機(jī)制很難作深入研究。原代肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)系統(tǒng)有助于在特定的體外條件下研究肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺動(dòng)脈組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：血管假性血友病子（WF）免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞  
細(xì)胞詳述：  
   肺動(dòng)脈起于右心室，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈，肺門入肺。由于肺動(dòng)脈連接著輸送靜脈血的右心室，所以，肺動(dòng)脈雖然是動(dòng)脈，但是它卻輸送靜脈血。血管平滑肌細(xì)胞互相連接，形成管狀結(jié)構(gòu);在功能上可以通產(chǎn)生連續(xù)收縮，使器官對抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀。該細(xì)胞所表達(dá)的鈣通道表面表達(dá)的ICAM-1和CAM-1，參與血管壁炎癥反應(yīng)。體外培養(yǎng)的肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞呈梭形、星形或不規(guī)則形。  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺動(dòng)脈組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
肺大動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺動(dòng)脈組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：波形蛋白(imentin)免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述：  
肺泡組織是機(jī)體暴露于外界環(huán)境的zui大表面，哺乳動(dòng)物肺臟由40多種不同類型細(xì)胞組成Ⅱ肺泡上皮細(xì)胞，為小的，立方形細(xì)胞，胞體較小，核圓，占上皮細(xì)胞的60%左右，占所有肺細(xì)胞的15%左右，但僅覆蓋5%的肺泡表面。處于小內(nèi)皮和間質(zhì)細(xì)胞、大的巨噬細(xì)胞和Ⅰ型細(xì)胞之間。  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：肺表面活性蛋白A(SP-A)免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)  
氣管上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述：  
氣管以軟骨、肌肉、結(jié)締組織和粘膜構(gòu)成。軟骨為"C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纖毛上皮細(xì)胞，它與基底細(xì)胞及杯狀細(xì)胞一起構(gòu)成假復(fù)層上皮，到達(dá)氣管腔表面的大部分細(xì)胞為纖毛上皮細(xì)胞，基底細(xì)胞與基底膜相連，通過半橋粒固定于上皮，在遠(yuǎn)端下呼吸道中，Clara細(xì)胞和基底細(xì)胞占優(yōu)勢，纖毛細(xì)胞已不存在，杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，上皮形態(tài)更象柱狀，整個(gè)上皮存在于一薄層基底膜上，通過間質(zhì)結(jié)締組織組成的網(wǎng)狀層相互支撐，上皮下存在其它的結(jié)締組織和纖維細(xì)胞。  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常氣管組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
氣管平滑肌細(xì)胞  
細(xì)胞詳述：  
哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約 2000 萬人罹患哮喘。近些年，由于霧霾等空氣質(zhì)量與環(huán)境污染程度的日益惡劣，呼吸系統(tǒng)疾病也逐漸成為了*范圍影響人類健康zui嚴(yán)重的慢性疾病之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年，世界上將會(huì)有 4 億人患上哮喘。哮喘發(fā) 病 癥 狀 眾 多，早 期 表 現(xiàn) 為 過 敏 性 炎癥，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管，導(dǎo)致氣道狹窄、氣道高反應(yīng)及氣道重塑，患者出現(xiàn)胸悶、氣喘等癥狀，嚴(yán)重時(shí)危及生命。此，對哮喘的發(fā)病機(jī)理與治療的研究是至關(guān)重要的。在對哮喘發(fā)病機(jī)制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標(biāo)之一，針對氣 管 平 滑 肌 細(xì) 胞 ( airway smooth muscle cells，ASMCs) 的形態(tài)學(xué)觀察與細(xì)胞增殖速率的測量是在細(xì)胞生物學(xué)水平研究哮喘發(fā)病機(jī)制的常用手段。  
細(xì)胞特性:  
1)        組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常氣管組織。  
2)        細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。  
3)        鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)        不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)        細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
支氣管上皮細(xì)胞