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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間：2017-06-01 08:21:56瀏覽次數(shù)：266
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細(xì)胞名稱 SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞（亞系）；293T/17
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞來源于表達(dá)SV40T抗原的293T細(xì)胞；可以產(chǎn)生高滴度的有感染性的逆轉(zhuǎn)錄病毒。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；4mM L-glutamine
傳代方法 1:4~1:8傳代；2~3天換液1次。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：12；D16S539：9，13；D18S51：17，18；D19S433：17，18；D21S11：28，30.2；D2S1338：19；D3S1358：15，16，17；D5S818：8，9；D7S820：12；D8S1179：11，12，14；FGA：23；TH01：7，9.3；TPOX：11；vWA：16，19；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞（亞系）；293T/17實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重，然后按10微克／克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后，將動(dòng)物處死，用剪刀剪開皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，剔凈股骨上的肌肉，然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨，用注射器（內(nèi)裝5ml 1％ 檸檬酸鈉溶液）緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中，經(jīng)平衡后離心8分鐘，速度為1000轉(zhuǎn)／分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管沖勻沉淀物，在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后，以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1～2次，離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片，每片滴3滴細(xì)胞懸液，立即用嘴向載片上吹氣，使細(xì)胞均勻分散，在酒精燈火焰上來回烤一下，以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸緩沖液稀釋)，然后用水沖洗，片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相，轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目，屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
ETS1 cDNA Human 人 ETS1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ST6GAL1 cDNA Human 人 ST6GAL1 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
PKM cDNA Human 人 PKM2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
SFRP4 cDNA Human 人 sFRP-4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
SFRP4 cDNA Human 人 sFRP-4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CA12 cDNA Human 人 CA XII 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CA2 cDNA Human 人 CA II 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA2 cDNA Human 人 CA II 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TNFRSF10A cDNA Human 人 TRAILR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
PTPN1 cDNA Human 人 PTP1B / PTPN1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CA9 cDNA Human 人 CA IX 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA9 cDNA Human 人 CA IX 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
IL10 cDNA Mouse 小鼠 IL10 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
ANXA2 cDNA Human 人 ANXA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
TMED10 cDNA Human 人 TMED10 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
MYC cDNA Human 人 MYC 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
YWHAQ cDNA Human 人 YWHAQ 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
CSF2RB cDNA Human 人 CSF2RB 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CXCR4 cDNA Cynomolgus 食蟹猴 CXCR4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
