士鋒生物氨基轉(zhuǎn)移反應的定性鑒定

時間：2014-5-20閱讀：855

氨基移換酶也稱轉(zhuǎn)氨酶，它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基互換，這種作用稱為氨基移換作用。它在生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成與分解等中間代謝中，在糖、脂肪、蛋白質(zhì)三類物質(zhì)代謝的相互、相互轉(zhuǎn)化上都起著很重要的作用。任何一種氨基酸進行轉(zhuǎn)氨作用時，都由其專一的轉(zhuǎn)氨酶催化。它們的zui適pH 接近7.4。在各種轉(zhuǎn)氨酶中，以草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(簡稱谷草轉(zhuǎn)氨酶、GOT)及丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(簡稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶、GPT)活力zui強。它們催化的反應如下：

上述兩種酶均廣泛存在于生物機體中，在正常人血清中也有少量存在。機體發(fā)生肝炎、心肌梗塞病變時，血清中轉(zhuǎn)氮酶活力顯著增加，在臨床上轉(zhuǎn)氨酶活性的測定有重要意義。
測定轉(zhuǎn)氨酶活性的方法很多，如分光光度法，紙上層析法及光電比色法等。本實驗利用紙層析法，檢查由和丙酮酸在谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用下所生成的，證明組織內(nèi)氨基移換作用。為了防止丙酮酸被組織中其它酶所氧化或還原，可加碘乙酸或溴乙酸抑制酵解作用或氧化作用。
三、儀器、原料和試劑
儀器
解剖刀、剪及鑷子、解剖盤表面皿、勻漿器、臺秤、離心管和離心機(臺式)、試管及試管架、恒溫水浴、毛細玻璃管、直尺、2H 鉛筆、層析濾紙(國產(chǎn)新華1號濾紙)、電熱鼓風干燥箱、層析用具：玻璃鐘罩、層析缸和小燒杯。針、線、噴霧器。
原料
實驗動物家兔
試劑
1. 1/15mol/L 磷酸緩沖液(pH=7.4)
2. 1%溶液(用KOH 中和至中性)
3. 1%丙酮酸溶液(用KOH 中和至中性)
4. 0.1%碳酸氫鉀溶液

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