、原理:含鹽蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)凝膠層析柱時(shí),低相對(duì)分子量的鹽分子因浸入凝膠顆粒的微孔中,所以向下移動(dòng)的速度較慢;而大分子的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,以較快的速度流過凝膠柱,從而使蛋白質(zhì)與鹽分開。
二、材料與試劑:葡聚糖凝膠(Sephadex G25)、洗脫液(蒸餾水或適宜的緩沖溶液)、含鹽的蛋白質(zhì)溶液、蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑、無機(jī)鹽檢測(cè)試劑(依具體情況而定)
三、操作方法
1、凝膠的準(zhǔn)備:稱取葡聚糖5g,加入80ml洗脫液(可用水或適宜的緩沖液),在沸水浴中溶脹30min,用傾瀉去懸浮的小顆粒。然后裝進(jìn)內(nèi)徑1-1.2cm,高30-40cm的玻璃柱內(nèi)。注意裝填均勻,無氣泡和裂紋存在,并保持液面在凝膠表面以上。
2、加樣與洗脫:打開柱的出口,讓柱內(nèi)的液體慢慢流出,直至液面與凝膠床表面相平,然后加入2ml含鹽蛋白質(zhì)溶液,至樣品液面剛好到達(dá)凝膠床表面時(shí),加入30ml洗脫液(與溶脹和裝柱時(shí)所用液體*相同),以0.5-1ml/min的流速洗脫,每5ml裝試管分布收集。
3、收集的蛋白質(zhì)溶液可用280nm處的紫外光吸收法檢測(cè),也可用福林酚測(cè)定。而鹽根據(jù)具體的鹽確定檢測(cè)方法。