1．Transwell

關(guān)于Transwell這個詞該如何解釋，查了很多資料也未見準(zhǔn)確的注解，我覺得可以這么理解吧，trans-這個詞根有轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)運(yùn)、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置，根據(jù)Corning公司的Transwell說明書中的介紹，可以認(rèn)為這是一種膜濾器（Membranefilters），也可認(rèn)為是一種有通透性的支架（permeable supports）。

更準(zhǔn)確地說，Transwell應(yīng)該是一種實驗技術(shù)，這項技術(shù)的主要材料是Transwell小室（Transwellchamber，Transwell insert），其外形為一個可放置在孔板里的小杯子，不同廠家對Transwell會有不同的命名，而不同型號也可有不同形狀，不同大小，根據(jù)實驗需要，可有不同選擇。 閱讀全文

 

Transwell 實驗用品

我的課題涉及Transwell侵襲實驗和Transwell遷移實驗，其他方面的Transwell應(yīng)用我不太清楚，因此這里主要談?wù)凾ranswell侵襲實驗。

1．實驗用品：

① Transwell小室：

多種廠家可提供，論壇里常用的是Costar、Corning、BD生產(chǎn)的小室，我們實驗室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓滿月射天狼戰(zhàn)友介紹的Thincert。

這些廠家提供的小室，有的已鋪好基質(zhì)膠，買來就可以用，很方便，但也比較貴，我們實驗室用的Chemicon公司的ECM550系列是已經(jīng)鋪好膠的，質(zhì)量很好，但是非常貴，24孔板配套的小室，每個價格約130元，不*給大家。BD也有已包被好的，價格不清楚。Coster和Corning公司生產(chǎn)的小室，是論壇里比較常用的，好像是要自己鋪膠，但據(jù)說每個小室成本只有40左右，應(yīng)該比較適合中國國情... 閱讀全文 

Transwell 實驗操作步驟

一、Transwell小室制備

1.  無基質(zhì)膠Transwell小室制備

① 包被基底膜：

用50 mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4 ℃風(fēng)干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（collagen）的話，一般配成0.5 mg/ml，直接用槍吸了涂在膜上。

② 水化基底膜：

吸出培養(yǎng)板中殘余液體，每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養(yǎng)液，37℃，30min。另有tianjin_glioma戰(zhàn)友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9 ug/ul)60-80 ?l (注意體積不可太大，以剛把聚碳酸酯膜浸濕為)，置37 ℃ 30 min使Matrigel聚合成凝膠... 閱讀全文

Transwell的其他應(yīng)用的實驗步驟

1．Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實驗

過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。個人認(rèn)為，由于沒有基質(zhì)膠的阻擋，細(xì)胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細(xì)胞量要更大。我做侵襲實驗的細(xì)胞密度是1×105，而遷移實驗的密度是1×106。另外，下層培養(yǎng)液的FBS濃度也可適當(dāng)下調(diào)，我做侵襲實驗的濃度是5%，遷移實驗的濃度是2.5%。

2．Transwell上皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟

做了一段時間的原代細(xì)胞培養(yǎng)，把經(jīng)驗?zāi)贸鰜砀蠹曳窒硪幌掳?，請有關(guān)戰(zhàn)友共同探討：

(1). 將雄性wistar大鼠麻醉，開胸，將氣管取出，置于4℃含0.1％*XIV (Sigma)，100U/ml*和100ug/ml*（Gibco-BRL）、無Ca 2＋、Mg2＋，無血清的MEM。