細(xì)胞 凍存 復(fù)蘇

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇可以：（1）用于生物學(xué)保種；（2）用于醫(yī)學(xué)上干細(xì)胞研究；（3）用于傳代培養(yǎng)。

實驗方法原理

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。

一、材料準(zhǔn)備

1.  儀器：凈化工作臺、 離心機、恒溫水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、液氮冰箱。

2.  玻璃器皿：吸管（彎頭、直頭）、 培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、廢液缸。

3.  塑料器皿： 吸頭、槍頭、膠塞、移液管（10ml）、15ml離心管、凍存管（1～2ml）。

4.  其他物品：微量加樣槍、紅血球計數(shù)板、記號筆、*、移液槍。

5.  試劑：D-Hanks液、小牛血清