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免疫學檢測技術(shù)

時間:2015-5-8閱讀:371
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一、概述

    抗原與抗體的結(jié)合反應是一切免疫測定技術(shù)的zui基本原理。在此基礎上結(jié)合一些生化或理化方法作為信號顯示或放大系統(tǒng)即可建立免疫測定法,如放射免疫測定法、酶免疫測定法、熒光免疫測定法等。一個成功的免疫測定法必須具備3個要素:性能優(yōu)良的抗體、靈敏和專一性的標記物和的分離手段。按照是否使用標記物分為標記免疫測定法和非標記免疫測定法,后者又稱為經(jīng)典免疫測定法;按反應介質(zhì)分為均相或非均相(免疫復合物需分離后檢測)免疫測定法;按反應狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測定法。按照標記物種類,標記免疫測定法又分為放射性標記測定法和非放射性標記測定法。

目前zui常用的免疫學檢測技術(shù)如下:

1)放射免疫測定技術(shù)  

2)酶免疫測定技術(shù)

3)熒光免疫測定技術(shù)

4)發(fā)光免疫測定技術(shù)

5)膠體金免疫測定技術(shù)

二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

(一)ELISA的基本原理

 ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。這一方法的基本原理如下。

 (1)使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,井保持其免疫活性;

 (2)使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性.又保留酶的活性。

(二)ELISA的類型

 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型。

雙抗體夾心法測抗原

雙抗原夾心法測抗體

間接法測抗體

競爭法測抗體

競爭法測抗原

(三)ELISA的材料與試劑

 完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);結(jié)合物及標本的稀釋液;洗滌液;酶反應終止液。

免疫吸附劑 

結(jié)合物 

酶的底物

洗滌液

酶反應終止液

陽性對照品和陰性對照品

參考標準品

三、*的間接競爭ELISA檢測

(一)人工*抗原的合成

(二)合成抗原的鑒定

(三)抗體的制備與純化

(四)標準競爭抑制曲線的制作

(五)畜產(chǎn)品中SM2殘留的ELISA檢測

(六)方法評價

1  特異性

2  靈敏度

3  準確度

4  

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