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ELISA技術服務

時間:2014-10-11閱讀:495
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1、 ELISA服務流程

① 待測抗原/抗體的獲得;

② 抗原/抗體的包被;

③ 加入抗體/抗原,37℃溫育;

④ 底物液顯色;

⑤ 終止反應;

⑥ ELISA檢測儀檢測。

注:根據(jù)ELISA方法不同,操作步驟有區(qū)別。

2、 ELISA原理

酶聯(lián)免疫吸附測定(( Enzyme Linked Immunosor-ssay,ELISA)是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫技術,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域。ELISA原理是:抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記后,結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例關系。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg – ng/mL水平),并且重復性好。

3、 ELISA分類

①雙抗體夾心法測抗原;

②盡量選用新鮮的材料;

③實驗材料涉及危險品,loogene公司不予服務;

④雙抗原夾心法測抗體(圖1);

⑤間接法測抗體;

⑥競爭法測抗體(圖2);

⑦競爭法測抗原;

⑧捕獲包被法測抗體;

⑨ABS-ELISA法;

⑩單克隆抗體+多克隆抗體;

單克隆抗體+單克隆抗體:是兩種單克隆抗體針對抗原上不同的、相距較遠的兩個抗原決定簇,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。

圖1 雙抗原夾心法測抗體

圖2競爭法測抗體

4、 ELISA所需材料

①ELISA試劑:包被緩沖液、洗滌緩沖液、稀釋液、終止液、底物緩沖液、TMB使用液、ABTS使用液、抗原、抗體和酶標記抗體;

②耗材:

a: 聚苯乙烯塑料板(酶標板)40孔或96孔;

b: 50ul及l(fā)00uL加樣器,tip頭;

c: 待測標本(血清、細胞培養(yǎng)上清液、滲出液、唾液、組織提取物合成、基因表達產物的樣品及參照物);

d: 面巾紙、洗滌瓶;

③ELISA檢測儀(酶聯(lián)檢測儀,圖3);

① 4℃冰箱;

⑤37℃溫育箱。

圖3酶聯(lián)檢測儀

5、ELISA所需材料

① ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本,盡量選用新鮮血清樣本;

② 在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本;

③ 血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色;

④ 保存血清自采集時應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。

⑤ 實驗材料涉及危險品,loogene公司不予服務;

⑥ 提供盡量詳細的實驗背景材料;

⑦ 在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫凍存。

6、實驗周期

① 1-10個樣本,5個工作日

② 10-100個樣本,10個工作日

③ 100個樣本以上,20個工作日

7、提供結果

完整的實驗操作步驟、酶聯(lián)檢測數(shù)據(jù)等

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