這是電泳分析中zui常見的問題，多數(shù)是由于血清滴加不均勻或滴加過多，也有因薄膜質(zhì)量不合要求所致。點(diǎn)樣這一步非常關(guān)鍵，一定要按操作步驟進(jìn)行。首先選擇質(zhì)勻、孔細(xì)、染料吸附少的薄膜充分浸透緩沖液至濕度均勻無干白點(diǎn)。然后將濾紙吸去薄膜表面的多余水份，使薄膜含水量飽和均勻，這樣才能防止薄膜表面液體含量不均，水份移動(dòng)而引起標(biāo)本移位。

點(diǎn)樣前注意關(guān)閉門窗和風(fēng)扇，因空氣流通快可使標(biāo)本和水份蒸發(fā)而影響電泳圖形。點(diǎn)樣要力求做到均勻迅速，有報(bào)道，在實(shí)踐中把加樣器干沾血清，改為沾取標(biāo)本前先浸入蒸餾水中沾濕用吸水紙吸干后再沾血清，這樣加樣器內(nèi)均勻沾取血清的效果較干沾為佳。

 

問題是由于點(diǎn)樣后薄膜過干，或因電泳槽密閉性不良，或電流過大，溫度升高，薄膜水份蒸發(fā)干燥而造成的。因此薄膜一定要充分浸透后才能點(diǎn)樣，并注意檢查電泳槽是否蓋緊，電泳槽要放在遠(yuǎn)離光源熱源的陰涼之處。

在電泳過程中隨時(shí)觀察電壓電流的變化，因通電后產(chǎn)生一定的熱量，電流會(huì)有所增加。控制電壓100~110 V，電流0.5~0.6 mA/cm，電泳時(shí)間一般冬長(zhǎng)夏短，以區(qū)帶展開3.5~4 cm 即可（另加一條溴酚藍(lán)預(yù)染血清，同樣操作，指示區(qū)帶展開的距離）。

 

緩沖液的離子強(qiáng)度低于0.05即出現(xiàn)區(qū)帶拖尾現(xiàn)象，離子強(qiáng)度>0.075則區(qū)帶過于緊密。此時(shí)需要檢查更換緩沖液。常規(guī)操作一般使用連續(xù)電泳*鹽緩沖液pH8.6，離子強(qiáng)度0.06。電泳槽中緩沖液經(jīng)10次使用后，不應(yīng)簡(jiǎn)單地采取交換電極的方法，而是將緩沖液取出重新混合過濾后，再進(jìn)行使用，一般用4個(gè)周期后需更換新液。

王祖植通過實(shí)驗(yàn)說明，離子強(qiáng)度愈低，區(qū)帶展開愈長(zhǎng)，電泳速度愈快。電泳區(qū)帶展開的距離也跟薄膜數(shù)量有關(guān)。在教學(xué)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)薄膜愈少，展開的距離愈短，區(qū)帶愈清晰的現(xiàn)象。在儀器輸出電壓相同的情況下，薄膜愈少，加在薄膜兩端的電壓愈高，電壓高會(huì)使展開的長(zhǎng)度縮短。只要薄膜數(shù)量在5條以上，即可使圖譜展開長(zhǎng)度有較好的重現(xiàn)性。

 

這是薄膜兩邊電阻不一樣，電阻大的一邊電流小，速度慢，區(qū)帶展開短。造成這種現(xiàn)象的原因是薄膜未緊壓在電泳槽的濾紙橋上，使薄膜接觸不良而增大了電阻。在操作過程中，一定要注意使薄膜兩端緊壓在濾紙橋上。

 

這是電滲作用引起的。可升高點(diǎn)樣端的緩沖液面高度或適當(dāng)加大電流量克服之。

 

有些同學(xué)在實(shí)驗(yàn)中往往急于求成，染色時(shí)間未到便匆忙取出薄膜漂洗，結(jié)果造成了白蛋白區(qū)帶中間色淺的現(xiàn)象。造成這種現(xiàn)象的另一個(gè)原因是白蛋白含量過高。可增加染色時(shí)間或減少點(diǎn)樣量解決之。

 

陳舊標(biāo)本可使區(qū)帶分離清晰度大為降低。應(yīng)盡量當(dāng)日標(biāo)本當(dāng)日做，zui多不超過2天。另外標(biāo)本不可溶血，因溶血標(biāo)本中血紅蛋白與β球蛋白的電泳區(qū)帶相重迭?？稍斐?beta;球蛋白含量升高而蛋白質(zhì)含量相對(duì)減少的結(jié)果。

 

這是染色液陳舊所致，染色液存放和使用過久，會(huì)降低蛋白質(zhì)結(jié)合染料的能力。發(fā)現(xiàn)正在使用的染液已陳舊時(shí)，應(yīng)立即全部棄去，更換新液。

 

薄膜未干或透明液中醋酸含量不足可造成膜發(fā)白而不能達(dá)到透明的目的，應(yīng)將薄膜晾干，適當(dāng)增加透明液的醋酸濃度。

 

室內(nèi)溫度過高或透明液醋酸濃度過高均可使膜溶解?？刹捎眠m當(dāng)降低透明液醋酸濃度的辦法來解決。