酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA) 是一種免疫學(xué)技術(shù)，用于檢測(cè)和測(cè)量特定蛋白質(zhì)，如生物樣品中的抗體、抗原和激素等。

如下圖所示：我們將從以下兩個(gè)方面對(duì)試劑盒進(jìn)行研究：

首先我們從ELISA試劑盒的產(chǎn)品組成去了解試劑盒：在科研實(shí)驗(yàn)中一般采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定。ELISA試劑中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。詳情如下圖：

然后我們從ELISA試劑盒的性能方面去了解：

1、檢測(cè)范圍：

建立線性范圍：需測(cè)定9-11個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定3-4次。

驗(yàn)證標(biāo)稱線性參數(shù)：需測(cè)定4-6個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定3-4次。

所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測(cè)定，最好在一天之內(nèi)完成。

2、靈敏度：

示例：人 IL-13 的可檢測(cè)濃度為 0.1 pg/ml (6 次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值)。 10 個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩倍 SD，計(jì)算可檢測(cè)濃度。

注意：靈敏度跟檢測(cè)范圍點(diǎn)不相等。

3、穩(wěn)定性（重復(fù)性、精密性）：

酶標(biāo)板內(nèi)精密度 3 個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定 20 次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。酶標(biāo)板間精密度 3 個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè) 6 次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。  試劑盒一般板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% （統(tǒng)計(jì)學(xué)概念）  所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測(cè)定，最好在一天之內(nèi)完成。  批內(nèi)精密度：是眾多種類精密度中最基本的一個(gè)，它是在嚴(yán)格的相似條件下，所得到的最佳的精密度。  批間精密度：指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號(hào)試劑，在一段時(shí)間內(nèi)(一般為一個(gè)月或20個(gè)工作日)對(duì)同一測(cè)試樣品（常用質(zhì)控品）測(cè)量結(jié)果的精密度。  我們的試劑盒控制板內(nèi)，批內(nèi)CV值在10%內(nèi)，批間CV值在15%內(nèi)。

4、準(zhǔn)確度（回收率）：

示例：5 份健康人血清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的人 IL-13，未加人 IL-13 的血清作為本底，計(jì)算回收率。回收率的范圍從 82 %至 110 %，平均回收率為 98 %。

現(xiàn)在我們了解了產(chǎn)品的組成，那讓我們來看看實(shí)驗(yàn)中所需要的儀器和設(shè)備吧！