名稱 M14細(xì)胞(人黑色素瘤細(xì)胞)
別稱 M14-MEL; UCLA-SO-M14; UCLA SO M14; UCLA-SO-14; Melanoma 14; M-14
種屬 人
年齡（性別） 33歲
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 DMEM(PM150210)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)
推薦傳代比例 1:3-1:4
M14細(xì)胞(人黑色素瘤細(xì)胞)推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時間 ~26.3 hours
凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

細(xì)胞凍存操作要點：

1、細(xì)胞凍存前12~24h，換新鮮培養(yǎng)基，使細(xì)胞一直處于對數(shù)生長期。

2、待細(xì)胞長至80%匯合時*消化，用新鮮培養(yǎng)基吹打后制成細(xì)胞懸液，1000rpm離心10min。懸浮細(xì)胞則直接離心。

3、棄上清，加入凍存液重懸細(xì)胞沉淀，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL。將細(xì)胞懸液分至凍存管內(nèi)，每管1~1.5mL，擰緊蓋子。在管壁上做好標(biāo)記，標(biāo)明細(xì)胞名稱、凍存日期等。

4、按下列順序依次降溫：室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過夜→液氮保存。也可使用程序降溫盒更為方便，細(xì)胞凍存管放入程序降溫盒內(nèi)可直接放入-80℃過夜，再轉(zhuǎn)至液氮罐內(nèi)。注意程序降溫盒內(nèi)異丙醇的量必須高于zui低刻度線；凍存5次后異丙醇需要跟換一次，以免影響凍存效果。

5、細(xì)胞凍存后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長期保存，為穩(wěn)妥起見可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長情況，再繼續(xù)凍存。

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