10min病毒DNA/RNA提取試劑盒

該取試劑盒采用裂解液，可快速可靠的從糞便、淋巴液、血清、血漿樣本中純化出高純度的病毒 DNA/RNA。應(yīng)用本試劑盒提取的 DNA/RNA 可直接用于反轉(zhuǎn)錄、One-Step RT-PCR、文庫(kù)構(gòu)建等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
（1） 首本試劑盒中的 Washing Buffer 中已經(jīng)加乙醇，無(wú)需單獨(dú)添加。
（2）Virus DNA/RNA LB1，儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)有白色結(jié)晶沉淀，放置于 56℃水浴鍋溶解后，不影響使用效果。
（3）蛋白酶 K（20 mg/ml）長(zhǎng)期保存請(qǐng)儲(chǔ)存于-20℃，短期室溫保存（6 個(gè)月），其它組分儲(chǔ)存于室溫。
（4）該試劑盒的保質(zhì)期為 2 年。
操作方法
（1）在 1.5mL 離心管（自備）中加入 200μL 病毒液 （糞便提取液、血清、血漿等），加入 50μL Virus DNA/RNA LB1和 20μL 蛋白酶 K，漩渦混合均勻，室溫消化 5min。
（2）消化完畢后，向上述樣本中加入 700μL Virus DNA/RNABB2，漩渦混合 1min。
（3）將上述混合液全部倒入到吸附柱中，13000rpm 離心1min。
（5）倒掉廢液。向吸附柱中加入 500μL Washing Buffer，13000rpm 離心 15s。重復(fù)此步驟。
（6）將吸附柱重新放回離心機(jī)，13000rpm 空離心 1min，將殘留的乙醇甩干。
（7）將吸附柱芯放入到 1.5mLRnase Free 收集管中，向吸附柱芯中加入 30~80μLNucleaseFree，13,000rpm 離心1min，洗脫液即為 DNA/RNA 產(chǎn)物，冷凍保存。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。