南極熱敏UDG

是來源于嗜冷海洋細菌經大腸桿菌表達純化的的重組蛋白。
該酶能有效地水解單鏈或雙鏈DNA 上的niao嘧啶，產生的缺嘧啶位點，在高溫或高 pH下，極易水解斷裂。該酶對 RNA 無活性，主要用于 PCR擴增產物的防污染。大腸桿菌來源的niao嘧啶-DNA 糖基化酶較為耐熱，經 95℃10min 處理仍會殘留有少量的niao嘧啶-DNA 糖基化酶活性，導致含有 dU 堿基的 PCR 產物的降解。
而來源于嗜冷海洋細菌的熱敏型 UDG 在 50℃5min 即失活，在進行 PCR 擴增前，在 PCR 混合液中添加niao嘧啶-DNA 糖基化酶（熱敏性），25℃ 2min 即可消除以往 PCR 產物的殘留污染，由于niao嘧啶-DNA 糖基化酶（熱敏性）在 PCR 循環(huán)的 94℃變性一步便可被滅活，因此不會影響新的含 dU 的 PCR 產物。

活性定義：在標準反應體系下，37°C 每分鐘催化 60 pmol niao嘧啶從含niao嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為一個活性單位。
反應 Buffer：
ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)與絕大多數(shù)的 PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的，但在高離子濃度(>100 mM)下活性會受到抑制。在防污染 PCR 中的使用濃度推薦為 10 mU-50 mU/μ（l 25℃下作用 2min 即可），在不同的緩沖系統(tǒng)下可能會有差別。
酶儲存液：20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, ,50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
儲存：置于-20°C 可保存 2 年。
熱失活：50°C，5min。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，第鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。