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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Mycoplasma felisPCR |
貨號 | XG-P1789 |
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
克氏雙糖鐵瓊脂22240250g用于鑒別腸道菌發(fā)酵葡萄糖和乳糖,及產生硫化氫的生化反應
2 x YT Agar-capsule 培養(yǎng)基 5capsules incubation media 2 x YT Agar-capsule 培養(yǎng)基 5capsules
指狀青霉 支/瓶
腸球菌瓊脂250g用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)
Stuart運送培養(yǎng)基 250g 用于致病菌標本的運送保存POTASSIUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE *磺酸鉀 2926-27-4
Potassium benzylpenicillin 鉀 113-98-4
L-3-Pyridylalanine 3-(3-基)-L-丙酸 64090-98-8
3-(3-Pyridyl)-D-alanine 3-(3-基)-D-丙酸 70702-47-5IFNAR1 Others Human 人 IFNAR1 / IFNAR 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-R068大鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
小鼠前脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL
B16-F0-EGFP (穩(wěn)定株)小鼠黑色素瘤細胞 B16-F0-EGFP (stable sain) of mouse melanoma cells DMEM+10% FBS+200ug/ml G418
IL35 Protein Human 重組人 IL-35 (IL12A & IL27B) 蛋白 (Fc 標簽)
WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞) 5×106cells/瓶×2 C2C12, 小鼠肌原細胞
貓支原體PCR檢測試劑盒DTM培養(yǎng)基250g用于食品中真菌的培養(yǎng)
CATC瓊脂 250(g) incubation media CATC瓊脂 250(g)
弧菌選擇瓊脂平板 TCBS Agar Plate 10塊
D-環(huán)0.2加入250mlTSC瓊脂基礎中incubationmediaD-環(huán)0.2加入250mlTSC瓊脂基礎中
ArginineDextroseAgar7311-prfOEpiCM-prf上皮細胞培養(yǎng)基500mlincubationmedia7311-prfOEpiCM-prf上皮細胞培養(yǎng)基500ml 進口分裝 Sauchinone 三白草 177931-17-8 20mg
11949MS培養(yǎng)基(不含瓊脂和蔗糖)100L/瓶用于植物組織培養(yǎng)incubationmedia11949MS培養(yǎng)基(不含瓊脂和蔗糖)100L/瓶用于植物組織培養(yǎng) 進口分裝 Galantamine hydrobromide 加蘭他敏 19453 20mg
119361Kg/袋incubationmedia119361Kg/袋 進口分裝 Dendrobine 石斛堿 2115-91-5 20mg
11605大腸埃希氏菌O157顯色培養(yǎng)基1000ml/瓶用于O157菌快速檢測,O157菌顯紅色incubationmedia11605大腸埃希氏菌O157顯色培養(yǎng)基1000ml/瓶用于O157菌快速檢測,O157菌顯紅色 進口分裝 10-Gingerol 10-姜酚 23513-15-7 20mgLAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3
LA795瘤 肺腺癌
SK-OV-3人卵巢癌細胞 Human ovarian cancer cell line SK-OV-3 McCoy'5A+10% FBS
FLT3LG Protein Mouse 重組小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 蛋白 (Fc 標簽)
小鼠骨髓間充質肝細胞(MMSC-bm)(5×105) PANC-1, 人胰腺癌細胞 Human
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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