人體皮膚癌組織提取物【Cancer: Human Skin Cancer Derivatives】
皮膚癌是種發(fā)生于皮膚上的惡性腫瘤之一，按病理組織學主要分為基底細胞癌、鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、特發(fā)性出血性肉瘤（Kaposi肉瘤）、汗腺癌、隆突性皮膚纖維肉瘤、血管肉瘤等，其中以基底細胞癌和鱗狀細胞癌為常見。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體皮膚癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體皮膚癌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

cis-1,2-Diaminocyclohexane甘油酯激酶線粒體抗體anti- MINA antibody腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIS-2-BUTENE醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體anti- MINK1 antibody腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2-Butene-1,4-diol血管生成素樣蛋白3抗體anti- MIOX antibody血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIS-2-PENTEN-1-OL丸酸性酸酶抗體anti- MIP antibody血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Diethyl maleate微絲相關(guān)蛋白1抗體anti- MIP-3-beta antibody型纖溶酶原激活因子(uPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIS-STILBENE OXIDE自噬體ATG16L2蛋白抗體anti- MIP-3α antibody型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIS-DECAHYDRO-1-NAPHTHOL 99腺苷A1A受體抗體anti- MIPEP antibody細胞間粘附分子5(ICAM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

CIS-4,7,10,13,16,19-DOCOSAHEXAENOIC ACID ETHYL ESTER芳基硫酸酯酶B抗體anti- MIPOL1 antibody細胞間粘附分子5(ICAM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

人體皮膚癌組織提取物Cryptococcus albidus (Saito) Skinner var. ..生殖細胞增殖相關(guān)蛋白NA抗體Human B3GALT2(Beta-1,3-galactosyltransferase 2) ELISA Kit微精蛋白β(MSMβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..同源盒蛋白NOBOX抗體Human DNM2(Dynamin-2) ELISA Kit跨膜蛋白酶2(TMPRSS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus, mouse轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)蛋白NKX6.1抗體Human C19orf80(Betatrophin) ELISA Kit腫廇蛋白P63(TP63)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..造血蛋白1抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) ELISA Kit腎酶(RNLS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..NFKB激活蛋白抗體Human TXK(Protein tyrosine kinase 4) ELISA Kitγ-內(nèi)啡肽(γEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..NLE1蛋白抗體Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) ELISA Kit低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Yarrowia lipolytica (Wickerham et al.) van ..骨巢蛋白抗體Human SFRP1(Secreted frizzled-related protein 1) ELISA Kit抗原肽轉(zhuǎn)運蛋白1(TAP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..神經(jīng)生長因子受體抗體Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。