小鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物【Mouse Lung: Normal Vein Smooth Muscle Cell Derivatives】
小鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物是從小鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取的，小鼠肺大靜脈平滑肌細胞從正常小鼠肺大靜脈組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠肺大靜脈平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

Iron oxide red;Iron(III) oxide;Ferric oxide草酸根離子標液,C2O4-2(oxalic acid),100mg/L溶anti- GDAP1L1 antibody周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Iron sulfate草酸根離子標液,C2O4-2(oxalic acid),100mg/L溶anti- GDAP2 antibody周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Iron sulfide硫酸鹽-硫離子標液,SO4-S,100mg/L溶于H2Oanti- GDE1 antibody周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Iron(III) chloride solution;Iron (III) chloride hydrated;Iron(III) chloride;Ferric salts二酸根離子標液,C3H2O4-2,1000mg/L溶于H2Oanti- GDEP antibodyγ(Amyγ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

IsaMin blue;Brilliant sky blue 5G;C.I. 42700鉻酸根離子標液,CrO4-2,1000mg/L溶于H2Oanti- GDF8/Myostatin antibody唾液α1(AMY1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Isatin鉻酸根離子標液,CrO4-2,1000mg/L溶于H2Oanti- GDI1 antibody組織因子通道抑制因子(TFPI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

IsoaMyl acetate;γ-Methylbutyl ethanoate;Banana oil;AMyl acetate;Pear oil;3-Methyl-1-butanol acetate鉻酸根離子標液,CrO4-2,1000mg/L溶于H2Oanti- GDI1 antibody組織因子通道抑制因子(TFPI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

IsoaMyl alcohol;Isobutylcarbinol;Isopentyl alcohol;IsoaMyl alcohol priMary乳酸根離子標液,C3H5O3-,1000mg/L溶于H2Oanti- GDI2 antibody脂酶A2激活蛋白(PLAA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

小鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物frozen生長調節(jié)致癌基因gamma（GRＯγ）抗體anti- WTAP antibody神經元導向因子1(NAV1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn葡萄糖轉運蛋白12抗體anti- WTAP antibody神經軟骨蛋白(NCDN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Delacroixia coronata (Costantin) Saccardo e ..S轉移酶ζ1抗體anti- WTX antibodyNinein蛋白(NIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Rhizobium sp.甘胺酸-N-?；D移酶抗體anti- WWC2 antibody神經連接蛋白1(NLGN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human甘胺酸-N-?；D移酶樣1抗體anti- WWOX antibodyN-肉豆蔻?；D移酶2(NMT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Gloeophyllum sepiarium (Wulfen : Fries) Kar ..轉運蛋白G3PP抗體anti- WWP1 antibody核仁蛋白1()檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorok ..糖原蛋白1anti- WWP2 antibody神經絲束蛋白(NPTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Monilinia amelanchieris Honey, teleomorphγ谷氨酰轉肽酶2輕鏈抗體anti- XAB2 antibody軸突蛋白1(NRXN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)