人淋巴管內(nèi)皮細胞提取物【Human Lymph : Normal Lymphatic Blood Vessel Endothelial Cell Derivatives】
人淋巴管內(nèi)皮細胞提取物是從人淋巴管內(nèi)皮細胞提取的，人淋巴管內(nèi)皮細胞從正常人淋巴管組織制備。正常人淋巴管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人淋巴管內(nèi)皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

CalciuM phosphate Monobasic;Acid calciuM phosphate;PriMary calciuM phosphate;MonocalciuM phosphate;CalciuM bis(hydrogen phosphate)hydrate;CalciuM dihydrogen phosphate燒結(jié)礦標準物質(zhì)anti- FGF12 antibody兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒

CalciuM pyrophosphate燒結(jié)礦標準物質(zhì)anti- FGF13 antibody兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒

CalciuM silicate;Wollastonite燒結(jié)礦標準物質(zhì)anti- FGF16-Specific antibody兔子纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒

CalciuM Stearate (AS)燒結(jié)礦標準物質(zhì)anti- FGF17 antibody兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒

CalciuM Sulfate (AS);Selenite;Satin spar;Terra alba;Native calciuM sulfate;Precipitated calciuM sulfate;Satinite;Mineral white純鐵(99.94)anti- FGF18 antibody兔子細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒

CalciuM sulfiteZBM129焦碳11#anti- FGF2 antibody兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒

Calcon carboxylic acid;1-(2-Hydroxy-4-sulfo-1-naphthylazo)-2-hydroxy-3-naphthoic acidZBM118焦碳10#anti- FGF5 antibody兔子細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒

2-OxohexamethylenimineZBM117焦碳9#anti- FGF8 antibody兔子細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒

人淋巴管內(nèi)皮細胞提取物Homo sapiens, human酸化糖原合酶激酶-3α抗體anti- UCHL5 antibodyMetaxin 3蛋白(MTX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Sphingobium herbicidovorans (Zipper et al.) ..半乳糖腦苷脂酶抗體anti- UCHL5IP antibody軸突生長誘向因子5(Ntn5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白10抗體anti- UCK1 antibody假尿苷酸合酶3(PUS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozenDNA修復蛋白GIYD2抗體anti- UCK2 antibodyAnoctamin 10蛋白(ANO10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..G激酶錨定蛋白1抗體anti- UCKL1 antibodyAkirin 1蛋白(AKIRIN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mycobacterium shottsii Rhodes et al.生長抑制和分化相關(guān)蛋白抗體anti- UCMA antibodyTectonic 2蛋白(TCTN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Monacrosporium parvicollis (Drechsler) Cook ..生發(fā)中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體anti- UCN2 antibodyN-α-酰轉(zhuǎn)移酶40(NαA40)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Cochliobolus stenospilus (Drechsler) Matsum ..生長休止特定蛋白1抗體anti- UCP1 antibody核仁蛋白10(0)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。