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扇革蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-13 12:26:27瀏覽次數(shù):108次

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扇革蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒
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8-甲氧基異歐前胡內(nèi)酯
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注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。

產(chǎn)品名稱

 扇革蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒

 英文名稱

 Rhipicentor spp.

 貨號

 XG01P4028

產(chǎn)品特點:
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)

 

樣品RNA的抽提:

①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

樣品cDNA合成:
①反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1  逆轉(zhuǎn)錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致,然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。
具體計算如下:
RNA溶于40 ?l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495?l的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 ?l,剩余RNA總量為:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS,pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
②準(zhǔn)備RNA樣品
取3?gRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個更小稍微擴(kuò)散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。

SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

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Du145全細(xì)胞裂解液100ug100ug

NCI-H205(人腎上腺腺瘤細(xì)胞)櫟迷孔菌

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae紫色變異鏈霉菌 Streptomyces violovariabilis

木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)銹球菌 Sparassis crispa

WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞)Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

無花果曲霉 Aspergillus ficuum醬油曲霉

蘋果黑腐皮殼BABL/C小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
扇革蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒MFC小鼠胃癌細(xì)胞 MFC mouse gasic cancer cells RPMI1640(GIBCO)+10%FBS

小鼠腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)00mL 9045221化學(xué)試N去酰化酶/轉(zhuǎn)移酶4(NDST4)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

SOCS1英文名稱:UCHL5IP腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制相關(guān)蛋白1抗體

IL36RN Protein Human 重組人 IL1F5 / IL36RN 蛋白

9045221化學(xué)試Clarin 3蛋白(CLRN3)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

SOD1英文名稱:UACA神經(jīng)細(xì)胞膜糖蛋白M6a

小鼠外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)00mL 57817897化學(xué)試唾液轉(zhuǎn)移酶7F(SIAT7F)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

9045221化學(xué)試轉(zhuǎn)位因子蛋白2(TSPO2)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

SOD2英文名稱:UGT2B4G蛋白偶聯(lián)受體101抗體

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