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上海西格生物科技有限公司
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腸道沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-10-13 12:23:33瀏覽次數(shù):91次

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腸道沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒
上海西格生物相關(guān)產(chǎn)品:
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-4-O-葡萄糖苷
戈米辛G

注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

產(chǎn)品名稱

 腸道沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

 英文名稱

 Salmonella enterica

 貨號(hào)

 XG01P4048

產(chǎn)品特點(diǎn):
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)

 

樣品RNA的抽提:

①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1)紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

樣品cDNA合成:
①反應(yīng)體系
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1  逆轉(zhuǎn)錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致,然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。
具體計(jì)算如下:
RNA溶于40 ?l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495?l的TE中,測(cè)得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 ?l,剩余RNA總量為:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測(cè)
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS,pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。
②準(zhǔn)備RNA樣品
取3?gRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會(huì)在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒基因同源物(FOS)重組蛋白英文名稱:Recombinant V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS)

IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

D/E中和瓊脂/D-E中性瓊脂/戴伊恩格利中和瓊脂/ D/E Neutralizing Agar衛(wèi)生環(huán)境中微生物的分離培養(yǎng), 消毒效果測(cè)定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

OF發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

PALCAM瓊脂/PALCAM Agar單增李氏菌的選擇性分離250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

Quoirin&Lepoivre Medium with vitaminsBR10升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

RVS肉湯/RVS Broth食品中沙門氏菌檢驗(yàn)選擇性增菌250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

SD-39瓊脂/SD-39 Agar濾膜法大腸桿菌O157的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

SOB肉湯/SOB BrothBR250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

T1N3肉湯/T1N3 Broth霍亂弧菌的生長(zhǎng)試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

Tergitol-7瓊脂/Tergitol-7 Agar大腸菌群的鑒定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

雙洗瓊脂平板10塊國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

神經(jīng)母細(xì)胞瘤英文名稱:M17
腸道沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞Alcohol dehydrogenase*96T

WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞aldehyde dehydrogenase*96T

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞aldehyde dehydrogenase 2*96T

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞Aldehyde dehydrogenase family 1 member A3*96T

UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌acetyl CoA carbosylase*96T

Hela, 人宮癌細(xì)胞系acetyl CoA carbosylase 1*96T

HNE2, 人鼻咽癌細(xì)胞系acetylcholine*96T

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細(xì)胞系acetylcholine receptor antibody*96T

786-O [786-0], 人透明腺癌細(xì)胞Acetylcholinesterase*96T

HEC-1A, 人宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系A(chǔ)cetylcholinesterase antibody*96T

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