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細胞培養(yǎng)凍存和復蘇注意事項

時間:2021/10/8閱讀:3322
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  細胞凍存和復蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)里面容易出問題的部分,因此必須注意以下幾點:
 

  1. 注意無菌操作。
 

  2. 取細胞的過程中可能會接觸液氮,一定注意帶好防凍手套,護目鏡。
 

  此項尤為重要,如果凍存管密封不嚴,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時,在水浴中搖晃,凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸,所以,一定要戴保護眼鏡和手套,復蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
 

  3. 應(yīng)在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復溫速度太慢,則會造成細胞損傷。另外,細胞復蘇后的操作Hao在4℃冰浴中進行,以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
 

  4. 復蘇過程中,升溫的速率要大,把從液氮取出的細胞在短的時間內(nèi)放入水浴鍋。
 

  5. 離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。
 

  細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,經(jīng)驗總結(jié),培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。
 

  復蘇細胞分裝的問題:復蘇1管細胞一般根據(jù)情況可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。
 

  加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,從如果加培養(yǎng)基的太少,DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響。還有一個說法是1%。所以如果凍存液的濃度是10%DMSO,那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
 


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