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酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)技術(shù)詳細(xì)介紹

時間:2025/2/17閱讀:15
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酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)為免疫學(xué)中的經(jīng)典實驗,下面從定義、基本原理、分類方法、操作要點等方面對其進(jìn)行了詳細(xì)介紹。

◇質(zhì)量:

檢測用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑,適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,靈敏度高,多年專業(yè)酶免服務(wù),我們對所售產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底,每一份實驗結(jié)果都真實可靠!

◇注意事項:

在收集標(biāo)本前都有一個完整的計劃,清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測,對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,請造模取材后,將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。

◇液體類標(biāo)本:

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1、血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2、血漿:

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3、尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4、細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5、組織標(biāo)本:

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。


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