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ELISA洗滌手工洗板方式具體方法

時(shí)間:2024/10/14閱讀:150
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  ELISA洗滌手工洗板人為因素比較大,實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)驗(yàn)豐富,洗滌次數(shù)要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時(shí)防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成假陽性。每次洗完板后,在吸水紙上輕輕拍干,拍板時(shí)要垂直,避免交叉感染。用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;吸水紙要一次性使用,應(yīng)使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。酶結(jié)合物不耐干燥,特別在較高的溫度下更易失活,所以拍干的反應(yīng)板應(yīng)盡量縮短在空氣中暴露的時(shí)間,時(shí)間越長(zhǎng),吸光度值越低。
 
  手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種方法:
 
  一、浸泡式
 
  1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
 
  2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
 
  3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
 
  4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹di,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
 
  5.重復(fù)操作步驟3和4,洗滌3~4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。
 
  微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。
 
  洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%~0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
 
  二、流水沖洗式
 
  流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為徹di,且也簡(jiǎn)便、快速。
 
  已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
 

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