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細胞復蘇具體過程

時間:2024/9/18閱讀:73
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  細胞復蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍,再培養(yǎng)傳代。細胞復蘇應采用快速融化的方法,這樣的目的是為了讓細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化,從而避免慢悠悠的融化,使得水分滲入細胞內(nèi)再結(jié)晶,從而對細胞再次造成傷害,從而影響細胞的存活率。
 
  細胞復蘇具體過程:
 
  1:細胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的,所以拿出來后,應該盡快去37℃水浴鍋里解凍(我一般是放在PE手套里面,然后在37攝氏度的水域上快速融化。)這一步的操作不要超過一分鐘!
 
  2:用預熱的培養(yǎng)基稀釋凍存的細胞(這步我會把融化的凍存液加入到15ml的管子里,加入3ml的預熱的培養(yǎng)液,在超凈臺里完成)
 
  3:離心200g 5-10min,具體的離心的時間不同的細胞略有不同得具體得看培養(yǎng)的protocol
 
  4:在離心以后,倒掉上清(因為凍存液里用DMSO, 它的作用是在凍存細胞時加入,加入的量大概是總體積的10%,起到防凍劑的作用,防止冷凍過程中細胞內(nèi)形成冰晶。)
 
  5:用預熱的培養(yǎng)液重懸細胞(根據(jù)培養(yǎng)的細胞皿的體積調(diào)整,我參照了GM12878,K562的培養(yǎng)protocol,剛開始的細胞密度不要超過10^6 /ML,但是細胞的密度也別太稀了,要不然長的會不好)
 
  6:放到37℃,5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。
 
  PS:在看細胞凍存和復蘇的時候,有一個詞叫做“慢凍快融”,所以在解凍細胞的時候,在加入預熱的培養(yǎng)基洗細胞之前,操作盡量的快,減少DMSO對細胞的傷害。我的凍存液的配方是:90%的FBS+10%的DMSO,凍存效果沒問題!
 

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