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上海西格生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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科學(xué)保存生物抗體詳解

時(shí)間:2023/7/10閱讀:155
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  抗體無(wú)論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融,收到抗體后請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,對(duì)抗體進(jìn)行分裝,避免同一管抗體反復(fù)凍融(反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變 性,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力)??贵w保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果,如果抗體保存得當(dāng),抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。 請(qǐng)謹(jǐn)記,無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說(shuō)明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。


1. 收到抗體后,請(qǐng)務(wù)必在4℃,12000rpm,離心3分鐘,(無(wú)論是液體還是凍干粉狀態(tài)),再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請(qǐng)延長(zhǎng) 離心時(shí)間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來(lái))??贵w一般使用特制的儲(chǔ)存管,只有在12000rpm離心3分鐘,才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下 來(lái)(即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不wan 全,導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象)。


2. 對(duì)于ProSci大部分抗體,比較合適的保存方式是,分裝后保存在-20℃或者-80℃。

(1)對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō),保存在-20℃就 wan 全足夠了,沒(méi)有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)更好。

(2)分裝可以zui 大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。

(3)分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,最少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

(4)復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來(lái)。

(5)抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,4℃保存盡量不要超過(guò)1天。

(6)絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中,將抗體保存在冰箱里層,避免溫度變化造成反復(fù)凍融。


3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對(duì)抗體活性沒(méi)有影響。


4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1~2周的時(shí)間,所以是在低溫4℃的條件下來(lái)完成的。

4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過(guò)程),所以運(yùn)輸過(guò)程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸。

關(guān)于疊氮化na(sodium azide)的使用:

為了防止微生物污染,疊氮化na經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v))。ProSci的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.02%-0.05%的疊氮化na,在說(shuō)明書的儲(chǔ)存緩沖液中有標(biāo)明。

注:疊氮化na的去除方式

可以通過(guò)凝膠電泳或過(guò)濾的方式去除,IgG的分子量是150kDa(IgM約600kDa);疊氮化na的分子量只有65Da,使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除。


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