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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>科研抗體的制備操作與注意要素
抗體(antibody),(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識別特定外來物的一個*特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原。
抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的操作注意要素:
每次試驗前應(yīng)列出詳細(xì)試驗計劃,其中包含試驗意圖、擬用方法、所用一抗和二抗的品種和效價、預(yù)施行的操作流程計劃以及預(yù)期試驗結(jié)果等。試驗分組編號用玻璃筆標(biāo)記在玻片上,對每一抗體均應(yīng)配以陽性和陰性對照。關(guān)于抗體的操作過程要素:
1.抗體分裝購人的濃縮型抗體,為防止重復(fù)凍融而失效,一般需要分裝在多個安瓿中,依據(jù)需要量,每安瓿含10一20rA。除留一支現(xiàn)用,其余應(yīng)立即放置低溫冰箱內(nèi)貯存(-20℃以下)。用時取一支。以免長期保存在4℃冰箱內(nèi)失效。
2.無菌與消毒保持使用中的抗體無菌是困難的,但是與抗體接觸的東西如滴管、吸管、試管、安瓿以及加樣器等通過消毒,盡量削減污染的時機.不然抗體極易污染細(xì)菌與真菌,然后敏捷發(fā)生渾濁沉積而失效。
3.抗體稀釋一般按其作業(yè)濃度稀釋,如1:100、1:1000等,然后用旋渦器混勻液體。剩余的抗體可保存在斗℃冰箱內(nèi).盡量在1—2個月內(nèi)用完,而不 要放在0℃以下。不然抗體會很快結(jié)冰,重復(fù)凍融可使抗體效價急劇下降。關(guān)于抗體的稀釋液,在夏天溫度很高時,參加少許防腐劑如疊氮鈉或柳硫汞等,以免在切片上效果時間超過10小時而生真菌。
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