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一、CDX模型構(gòu)建的核心特點(diǎn)

二、CDX模型構(gòu)建流程

1. 腫瘤細(xì)胞準(zhǔn)備

• 細(xì)胞系選擇：

• 肺癌：A549（非小細(xì)胞肺癌）、H1975（EGFR突變）

• 結(jié)直腸癌：HCT116、SW480

• 乳腺癌：MCF-7（ER+）、MDA-MB-231（三陰性）

• 常用細(xì)胞系（示例）：

• 需定期STR鑒定，避免交叉污染。

• 細(xì)胞培養(yǎng)：

• 使用含10% FBS的培養(yǎng)基（如DMEM/RPMI-1640），傳代至對數(shù)生長期。

• 胰m消化后計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度（通常1×10?–5×10? cells/mL）。

2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

• 免疫缺陷鼠：

• 裸鼠（BALB/c nude）：T細(xì)胞缺陷，適合大多數(shù)實(shí)體瘤。

• NSG（NOD-scid IL2Rγ?/?）：高度免疫缺陷，適合低成瘤性細(xì)胞。

• 飼養(yǎng)環(huán)境：SPF級(jí)屏障系統(tǒng)，避免感染。

3. 移植方法

(1) 皮下移植（最c用）

• 步驟：

1. 麻醉小鼠（異f烷或腹腔注射戊巴b妥鈉）。

2. 背部或側(cè)腹皮膚消毒（酒精+d伏）。

3. 皮下注射腫瘤細(xì)胞懸液（100–200 μL，含1×10?–5×10? cells）。

4. 觀察注射部位是否形成明顯皮丘（避免漏液）。

• 優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，易于監(jiān)測腫瘤體積。

(2) 原位移植（模擬腫瘤微環(huán)境）

• 示例：

• 肝癌：脾臟注射（細(xì)胞遷移至肝）。

• 肺癌：氣管內(nèi)注射或尾靜脈注射（肺轉(zhuǎn)移模型）。

• 乳腺癌：乳腺脂肪墊注射（4號(hào)乳頭周圍）。

• 優(yōu)點(diǎn)：更接近臨床病理特征，但手術(shù)難度較高。

(3) 尾靜脈注射（轉(zhuǎn)移模型）

• 注射1×10?–1×10? cells（100 μL PBS），4–6周后解剖檢測肺/肝轉(zhuǎn)移灶。

4. 模型監(jiān)測與數(shù)據(jù)分析

• 腫瘤體積測量：

• 游標(biāo)卡尺測量長徑（L）和短徑（W），按公式計(jì)算：

  $$\text{Volume}=\frac{L\times W^2}{2}$$

• 每周測量2–3次，體積達(dá)1000–1500 mm3時(shí)需終止實(shí)驗(yàn)（倫理限制）。

• 終點(diǎn)指標(biāo)：

• 腫瘤重量：解剖后稱重。

• 組織學(xué)分析：H&E染色、Ki-67（增殖）、TUNEL（凋亡）。

• 分子檢測：qPCR/WB檢測靶基因表達(dá)。

三、CDX模型的應(yīng)用

1. 抗腫瘤藥物篩選

• 分組設(shè)計(jì)：對照組（PBS）、實(shí)驗(yàn)組（化療藥/靶向藥）。

• 評(píng)價(jià)指標(biāo)：抑瘤率（$\frac{\text{對照組體積－實(shí)驗(yàn)組體積}}{\text{對照組體積}}\times 100\mathrm{\%}$）、生存期。

2. 基因功能研究

• 構(gòu)建穩(wěn)定敲除/過表達(dá)細(xì)胞系（如CRISPR-Cas9），比較成瘤能力差異。

3. 免疫治療模型（需人源化小鼠）

• 共移植人PBMC或免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如抗PD-1抗體）。

四、常見問題與解決方案