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常見的報(bào)道基因包括β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸苷酶和螢光素酶。通用的報(bào)告基因是螢火蟲熒光素酶。由于這些報(bào)告分子較小且不需要ATP，因此其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用穩(wěn)步增加。來自海洋co足綱高斯王子的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。高斯熒光素酶是一種20kDa的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化，從而產(chǎn)生光。我們的Amplite™高斯熒光素酶報(bào)道基因檢測(cè)試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。我們的配方可產(chǎn)生一種發(fā)光產(chǎn)品，當(dāng)與高斯熒光素酶相互作用時(shí)，該發(fā)光產(chǎn)品會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的光。該套件提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件。該試劑盒具有很高的靈敏度，可以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行。半衰期為一小時(shí)的“發(fā)光型”信號(hào)在大量測(cè)定板中提供一致的信號(hào)。該測(cè)定法是兼容的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
| 發(fā)光酶標(biāo)儀 | |
| 推薦板 | 純白色 |
| 成分A：螢光素酶底物（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：反應(yīng)緩沖液 | 1小瓶（50 µL） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（5毫升） |
- 準(zhǔn)備樣品（50 µL）
- 加入50 µL高斯熒光素酶工作溶液
- 在室溫下孵育10-15分鐘
- 監(jiān)控發(fā)光強(qiáng)度
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.高斯熒光素酶原液（100X）：
將50 µL（對(duì)于Cat＃12530），0.5 mL（對(duì)于Cat＃12531）或2.5 mL（對(duì)于Cat＃12532）反應(yīng)緩沖液（組分B）轉(zhuǎn)移到1小瓶熒光素酶底物中（組分A），并混合均勻。
準(zhǔn)備工作溶液
使用1：100稀釋因子和測(cè)定緩沖液（組分C）稀釋100X高斯螢光素?zé)晒馑孛笢y(cè)定儲(chǔ)備液，以制備高斯螢光素?zé)晒馑孛腹ぷ魅芤骸?em>注意：重新配制的高斯熒光素酶工作溶液對(duì)光非常敏感。它不穩(wěn)定，應(yīng)準(zhǔn)備新鮮，放在冰上，并在2小時(shí)內(nèi)使用。
程序
- 通過在所需化合物緩沖液中加入10 µL 10X測(cè)試化合物（96孔板）或5 µL 5X測(cè)試化合物（384孔板）來用測(cè)試化合物處理細(xì)胞（或樣品）。對(duì)于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。
- 將細(xì)胞板在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育所需的時(shí)間，通常為4小時(shí)至過夜。
- 運(yùn)行高斯熒光素酶測(cè)定：將連續(xù)稀釋的高斯熒光素酶或培養(yǎng)上清液的50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板移液到微量滴定板中，然后與50 µL /孔/ 96-孔混合?？装寤蚋咚篃晒馑孛腹ぷ魅芤旱?2.5 µL /孔/ 384孔板。
- 在避光的條件下，在室溫下孵育平板10至15分鐘。
- 用發(fā)光計(jì)讀取發(fā)光強(qiáng)度。
12531 Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 Plates 12532 Amplite™高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12535 Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 1 plate 12536 Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 10 plates 12537 Amplite™海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* 100 plates 12551 Amplite™ 比色法β-內(nèi)酰胺酶活性檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit 200 Tests
