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常見的報道基因包括β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸苷酶和螢光素酶。通用的報告基因是螢火蟲熒光素酶。由于這些報告分子較小并且不需要ATP，因此其他熒光素酶（例如海腎熒光素酶）的使用穩(wěn)步增加。我們的Amplite™Renilla螢光素酶報告基因基因檢測試劑盒旨在提供一種快速，靈敏的方法來檢測海三色堇（Renilla reniformis）中的螢光素酶。它使用專有的發(fā)光配方來定量基于細胞的測定中的海腎熒光素酶活性。我們的配方可產(chǎn)生一種發(fā)光產(chǎn)品，當與海藻熒光素酶相互作用時可提供強力發(fā)光。該套件提供了所有必要的組件。它具有很高的靈敏度，可以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行。半衰期為一小時的“發(fā)光型”信號在大量測定板中提供一致的信號。該測定法與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容。該試劑盒可以測量野生型和合成的hRluc基因的主要表達或基因表達。
| 發(fā)光酶標儀 | |
| 推薦板 | 純白色 |
| 組分A：100X螢光素酶底物（光敏） | 1小瓶（100 µL） |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
- 準備細胞板
- 根據(jù)需要處理細胞
- 從細胞板中去除培養(yǎng)基
- 加入海腎熒光素酶工作溶液（對于96孔板為100 µL /孔，對于384孔板為25 µL /孔）
- 在室溫下孵育5-10分鐘
- 監(jiān)控發(fā)光強度
重要說明
使用前，將所有套件組件解凍至室溫。對于所有發(fā)光實驗，建議使用白板以獲得*結(jié)果。
1.將一體積的100X熒光素酶底物（組分A）添加到100體積的測定緩沖液（組分B）中，制成海腎熒光素酶工作溶液。 注意：重新配制的海腎熒光素酶工作溶液對光非常敏感，應(yīng)避免光照。此外，它不穩(wěn)定，應(yīng)準備新鮮，放在冰上，并在2小時內(nèi)使用。
程序
- 通過在所需化合物緩沖液中加入10 µL 10X測試化合物（96孔板）或5 µL 5X測試化合物（384孔板）來用測試化合物處理細胞（或樣品）。
- 將細胞板在5％CO 2培養(yǎng)箱中于37°C孵育所需的時間，通常為4小時至過夜。
- *取出介質(zhì)。
- 每孔海腎熒光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。
- 將板在室溫下孵育5-10分鐘。避光。
- 用發(fā)光計監(jiān)控發(fā)光強度。
數(shù)據(jù)分析
1e+51e+410001001010001001010.11e-2- Dose-ResponseData legendGenerated with Quest Graph™Renilla Luciferase (pg/well/100µL)RLUHover mouse to interact
從空白標準孔獲得的讀數(shù)（RLU）用作陰性對照。從其他標準的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數(shù)，以獲得標準曲線和方程式。該方程可用于計算海腎熒光素酶樣品。
| 12536 | Amplite™海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* | 10 plates |
| 12537 | Amplite™海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | Amplite™ Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit *Bright Glow* | 100 plates |
| 12551 | Amplite™ 比色法β-內(nèi)酰胺酶活性檢測試劑盒 | Amplite™ Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit | 200 Tests |
