| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥490 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 490元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-06-14 10:34:25瀏覽次數(shù)：228
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葡萄糖氧化酶（GOD）活性測(cè)定試劑盒
葡萄糖氧化酶（GOD）活性測(cè)定試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 葡萄糖氧化酶（GOD）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 （貨號(hào)：WS1950F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 葡萄糖氧化酶（GOD，EC 1.1.3.4）是一種常見于多種微生物中的氧化還原酶，葡萄糖 氧化酶催化葡萄糖和氧反應(yīng)生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫和特異顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生 （粉）紅色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在510nm有吸收峰，進(jìn)而得到葡萄糖氧化酶酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 粉體 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下使粉體落入底部，每支 加 1.2mL 的蒸餾水溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)管 液體 mL×1 支 4℃保存 三、所需儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、移液器、研缽、離心機(jī)。 四、葡萄糖氧化酶（GOD）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 0.1g 組織樣本（水分充足的樣本建議取 0.2g 左右），加 1mL 的蒸餾水研磨，粗提液 全部轉(zhuǎn)移到 EP 管中，12000rpm，4℃離心 10min，上清液待測(cè)。 ② 細(xì)胞/細(xì)菌樣本： 先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)胞/細(xì)菌加入 1mL 蒸餾水或 PBS 或生理鹽水，超聲波破碎細(xì)胞/細(xì)菌（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測(cè)： 1 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，設(shè)定波長(zhǎng)到 510nm，蒸餾水調(diào)零。 2 所有室溫至室溫（25℃）。在 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 試劑一 300 試劑二 300 樣本 60 混勻，37℃孵育 5min 試劑三 40 混勻，于 510nm 下讀取吸光值 A1，37℃孵育 20min 后讀取吸光值 A2，△A =A2-A1。 【注】：若△A 值在零附近，則增加樣本加樣體積 V1（如增至 50μL，則試劑一相應(yīng)減少）， 或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 T（如延長(zhǎng)至 40min 或 60min），則改變后的 V1 和 T 需代入公式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 4.8162x - 0.0364：x 為 H2O2標(biāo)準(zhǔn)品(μmoL)，y 為ΔA。 2、按樣本鮮重計(jì)算： 單位定義：在 37℃，每克組織每小時(shí)生成 1μmoLH2O2 定義為一個(gè)酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/g 鮮重)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(W×V1÷V)÷T =10.4×(ΔA+0.0364)÷W 3、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 單位定義：在 37℃，每毫克組織蛋白每小時(shí)生成 1μmoLH2O2 定義為一個(gè)酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/mg prot)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(V1×Cpr) ÷T=10.4×(ΔA+0.0364)÷Cpr 4、按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算： 單位定義：在 37℃，每 104個(gè)細(xì)胞/細(xì)菌每小時(shí)生成 1μmoLH2O2 定義為一個(gè)酶活單位（U）。 GOD (μmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(500×V1÷V)÷T=0.021×(△A+0.0364) V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.06mL； T---反應(yīng)時(shí)間，20min=1/3h； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)胞數(shù)量，萬(wàn)； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（250μmol/mL）。 2 把母液稀釋成以下濃度：0，0.5，1，1.5，2，2.5μmol/mL。也可根據(jù)實(shí)際調(diào)整濃度。 3 在 96 孔板中直接加入：20μL 標(biāo)準(zhǔn)品+80μL 試劑一+100μL 試劑二，混勻于 510nm 處 讀值，依據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
