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食品中亞硝酸鹽含量試劑盒

食品中亞硝酸鹽含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS1340F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 在食品中，亞硝酸鹽是肉制品及其他食品加工過(guò)程中常用的一種食品添加劑，但是人 體長(zhǎng)期攝入亞硝酸鹽過(guò)量的食品，產(chǎn)生直接毒害和慢性毒害，因此硝酸鹽的檢測(cè)具有特 別重要的意義。 待檢樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮 化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，在 540nm 處有特征吸收峰。進(jìn)而計(jì)算得 出亞硝酸鹽含量。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 A1 液體 7mL×1 瓶 4℃保存 提取液 A2 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部， 再加 4mL 的蒸餾水充分溶解備 用。 提取液 A3 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部， 先 加 0.12mL 的 乙 酸 ， 再 加 3.88mL 的蒸餾水，溶解備用。 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃避光保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部， 再加 10mL 的 20%鹽酸水溶液 （2mL 鹽酸緩慢加入 8mL 蒸餾 水中），充分溶解備用。 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃避光保存 臨用甩幾下使粉劑落入底部， 再加 5mL 蒸餾水溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、蒸餾水、天平、常溫離心機(jī)、乙酸、 鹽酸。 四、食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本處理 ① 干酪奶酪樣本：稱取約 0.3g 樣本于研缽中，加 1mL 蒸餾水研磨成勻漿后全部轉(zhuǎn)移 至 2mLEP 管中，再加入 0.04mL 的 3%乙酸溶液（0.3mL 冰乙酸緩慢加入 9.7mL 水 中），最后用蒸餾水定容到 2mL。4℃靜置 20min 后，除去上層脂肪，12000rpm 室 溫離心 10min，取上清液檢測(cè)。 ② 液體奶制品：0.5mL 樣本，加入 0.125mL 提取液 A1，混勻后加入 0.6mL 蒸餾水， 沸水浴 15min，冷卻至室溫，加入 0.05mL 提取液 A2，混勻后加入 0.05mL 提取液 A3，混勻，用蒸餾水定容到 2mL，室溫靜置 30min，除去上層脂肪，12000rpm 離心 取上清液檢測(cè)。 ③ 其他樣本：稱取約 0.1g 樣本（含水量高可取 0.5）于 2mLEP 管中，加入 0.125mL 提 取液 A1，混勻后加入 1.5mL 蒸餾水，組織研磨機(jī)破碎或者用研缽磨碎后再全部轉(zhuǎn) 移至 2mLEP 管中；沸水浴 15min，冷卻至室溫，加入 0.05mL 提取液 A2，混勻后 加入 0.05mL 提取液 A3，混勻，用蒸餾水定容到 2mL，室溫靜置 30min，除去上層本試劑盒僅供科研使用 2 脂肪，12000rpm 室溫離心 10min，取上清液檢測(cè)。 【注】：若高蛋白樣本，提取后上清液依然渾濁，可以減少樣本取樣量 W，或在提取過(guò)程中將提取 液 A2 和 A3 分別增加到 0.1mL（不能超過(guò) 0.1mL），蒸餾水相應(yīng)減少。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 標(biāo)準(zhǔn)品使用液配制：稱取 2mg 標(biāo)準(zhǔn)品至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸餾水溶解標(biāo)準(zhǔn) 品即 1mg/mL 的亞*酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品溶液，再用蒸餾水稀釋 1000 倍（1 份母液+999 份 蒸餾水）即 1μg/mL 亞*酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品使用液。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 空白管 （僅做一次） 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 樣本 665 蒸餾水 665 標(biāo)品 665 試劑一 140 140 140 混勻，室溫（25℃）準(zhǔn)確反應(yīng) 5min 試劑二 70 70 70 混勻，室溫（25℃）準(zhǔn)確反應(yīng) 15min，全部轉(zhuǎn)移至 1mL 比色 皿中，立即于 540nm 讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定- A 空白。 【注】：*低檢出限：液體乳是 0.06mg/kg；干酪及其他樣本是 1mg/kg。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、液體樣本計(jì)算公式： 食品中亞硝酸鹽含量(以亞*酸鈉計(jì))（mg/L）=△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×C 標(biāo)×V÷V 樣×D =4×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×D 2、固體樣本計(jì)算公式： 食品中亞硝酸鹽含量(以亞*酸鈉計(jì))（mg/kg）=△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)×C 標(biāo)×V÷W×D =2×△A÷(A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白)÷W×D V---提取液總體積，2mL； C 標(biāo)---標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μg/mL 亞*酸鈉； V 樣---液體樣本取樣檢測(cè)體積，0.5mL； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---實(shí)際取樣質(zhì)量，g。