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土壤堿性磷酸酶(S-AKP/ALP)試劑盒

土壤堿性磷酸酶(S-AKP/ALP)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性測(cè)定試劑盒說明書 (貨號(hào)：WS5030F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 土壤磷酸酶對(duì)土壤磷素的有效性具有重要作用，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向和強(qiáng)度的 指標(biāo)，也與土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的關(guān)系。 本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單、靈敏、快速的檢測(cè)方法。在酸性環(huán)境中，土壤酸性磷酸酶 （S-ACP）催化磷酸對(duì)硝基苯酯（PNPP）生成黃色對(duì)硝基*酚（PNP），該產(chǎn)物在 405nm 處有吸收峰。通過檢測(cè) PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-ACP 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 55mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前加 10mL 試劑一充分溶解， 現(xiàn)配先用，一周內(nèi)用完。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、 可調(diào)式移液器、蒸餾水、甲苯。 四、土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風(fēng)干或者 37 度烘箱風(fēng)干），先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 405 nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 空白管 （只做一次） 土樣 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 0.1g 鮮土或 0.05g 干土 甲苯 10 10 10 試劑一 290 490 290 試劑二 200 200 混勻， 37℃（水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱）振蕩反應(yīng) 1h 試劑三 300 300 300 混勻，12000rpm 室溫離心 10min，上清液全部轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃 比色皿（光徑 1cm）中，于 405nm 下讀取各管吸光值 A，△A=A 測(cè)定-A 對(duì)照-A 空白（每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管）。 【注】：1.最后一步檢測(cè)時(shí)，若有結(jié)晶析出，需要 37℃復(fù)溶再讀取吸光值。 2.若ΔA 在零附近徘徊，可延長(zhǎng) 37℃的孵育時(shí)間 T（如增至 4 小時(shí)或更長(zhǎng)），或增加 土樣質(zhì)量 W（如增至 0.2g）。則改變后的 T 和 W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 3.若測(cè)定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時(shí)間 T（如減至 0.5 小時(shí)或更短）。 則改變后 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算?；?qū)ψ詈笠徊降拇龣z測(cè)上清液（包括測(cè)定管、對(duì)照管 和空白管）同時(shí)用蒸餾水進(jìn)行稀釋，稀釋倍數(shù) D 代入計(jì)算公式。 4.若同時(shí)檢測(cè)一大批同一背景下土壤樣本（如都是黃土，黑土，紅土，黃土等），可做三次樣 本自身對(duì)照管（取平均值作為這批土壤樣本的對(duì)照管），可從稱樣到檢測(cè)步驟節(jié)省檢測(cè)時(shí)間。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0197x - 0.004；x 是 PNP 摩爾質(zhì)量（nmol），y 是△A。 2、定義：每克土壤每小時(shí)水解 PNPP 產(chǎn)生 1nmol 對(duì)硝基*酚（PNP）為一個(gè)酶活單位。 S-ACP(nmol/h/g 土樣)=[(△A+0.0004)÷0.0197]÷W÷T×D=50.8×(△A+0.0004)÷W×D D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1； W---土壤樣品質(zhì)量，g； T---催化反應(yīng)時(shí)間，1h； PNP 相對(duì)分子質(zhì)量---139.11。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（10μmol/mL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解， 若有結(jié)晶析出，需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmol/mL。也可 根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 在 EP 管中直接加入：10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+490μL 試劑一+300μL 試劑三，混勻，取出全部 上清液至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。