| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥730 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 730元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-31 10:05:23瀏覽次數(shù)：205
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土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒
土壤羥胺還原酶(HR)試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤羥胺還原酶（hydroxylamine reductase,HR）試劑盒說明書 （貨號：WS4330F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原 態(tài)化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響 氮肥的利用效率。 硫酸鐵銨中的 Fe3+可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為 Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與鄰 菲羅琳形成橙紅色配合物，在 510nm 處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形 成量減少，510nm 處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性大小。 二、試劑盒的組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部， 再加 5mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部， 再加 10mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 25mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 16mL×1 瓶 4℃保存 試劑五 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑六 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部， 再加 5mL 蒸餾水溶解備用。 試劑七 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部， 再加 5mL 無水乙醇溶解備用。 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、可調式移液器、天平、常溫離心機、震蕩儀、氮 吹儀。 四、土壤羥胺還原酶（HR）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 土取新鮮土樣風干或者 37 度烘箱風干，先粗研磨，過 40 目篩網(wǎng)備用。 【注】：1.壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層 5cm 以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。 2.土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： 1 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 510nm，蒸餾水調零。 2 所有試劑解凍至室溫（25℃）。 3 試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。 4 反應體系能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封。 5 在 1mLEP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 空白管 測定管 對照管 風干土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 160 160本試劑盒僅供科研使用 2 蒸餾水 160 試劑二 160 160 160 試劑三 480 480 480 混勻后，用 N2氣流排除管中空氣，立即密封，于 30℃反應 1h 試劑四 320 320 320 充分震蕩 10min，8000rpm，室溫（25℃）離心 10min，取上清液待測。 6 顯色反應，在 96 孔板中依次加入： 上清液 80 80 80 試劑五 160 160 160 試劑六 80 80 80 試劑七 80 80 80 蒸餾水 400 400 400 充分混勻，25℃靜置顯色 10min，于 510nm 處讀取各管吸光值 A， △A＝A 空白－（A 測定－A 對照）。 【注】若△A 在零附近徘徊，可加大土壤取樣量（如增至 0.15g），或延長 30℃的反應時間至 4h 或更 長，或在顯色反應階段加大上清液的量（如增加至 120μL，則蒸餾水相應減少）。則改變后 的樣本質量 W 或反應時間 T 或上清液體積 V2 需代入公式重新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.4298x - 0.0127，x 是標準品羥胺質量（μg），y 是△A。 2、酶活定義：每克土壤每小時轉化 1μg 羥胺為一個酶活力單位。 HR 活性(μg/d /g 土樣)=(△A+ 0.0127)÷0.4298×(V1÷V2)÷W÷T =32.5×(△A+ 0.0029)÷W V1---加入提取液體積，1.12mL； V2---顯色反應階段上清液體積，0.08mL W---樣本質量，g； T---1h。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（1mg/mL）：向標準品 EP 管里面加入 2ml 蒸餾水（母液需在兩天 內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05 mg/mL。也可根 據(jù)實際樣本來調整標準品濃度。 3 依據(jù)顯色反應階段加樣體系操作，80μL 上清液換成標準品，以標準品的質量為橫坐 標，吸光值為縱坐標，即可制作標準曲線。
