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GABA轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)試劑盒
GABA轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)試劑盒
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更新時間:2024-05-28 10:54:16瀏覽次數(shù):229

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【簡單介紹】
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GABA轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)試劑盒
γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T,EC 2.6.1.96)是 GABA 支路中的關(guān)鍵酶之一,催化 GABA 的降解和轉(zhuǎn)化。

GABA轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)試劑盒

GABA轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)測定試劑盒說明書 (貨號:WS3011F 分光法 24 樣) 一、產(chǎn)品簡介: γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T,EC 2.6.1.96)GABA 支路中的關(guān)鍵酶之一,催化 GABA 的降解和轉(zhuǎn)化。 本試劑盒利用γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)催化丙酮酸和 GABA 反應(yīng)生成生成琥 珀酸半醛和丙an酸,通過檢測 GABA 的減少量進(jìn)而得出 GABA-T 酶活力大小。 反應(yīng)方程式:4-aminobutanoate + pyruvate = succinate semialdehyde + L-alanine 二、試劑盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部, 再加 3mL 試劑三溶解備用。 試劑二 粉體 mg×1 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部, 再加 5mL 試劑三溶解備用。 試劑三 液體 8mL×1 4℃保存 試劑四 液體 11mL×1 4℃保存 試劑五 液體 10mL×1 4℃保存 試劑六 A:液體 13mL×2 B:液體 2mL×1 4℃保存 臨用前取 0.9mL B 液進(jìn)一瓶 A 液中,混勻后作為試劑六使用。 混勻后的試劑六半個月內(nèi)用完。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、 研缽、冰和蒸餾水。 四、γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(GABA-T)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣本情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、 樣本制備: 取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿,12000rpm,4℃離心 10min,取上清液待用。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取 2、 上機(jī)檢測: 1 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 645nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫,在 EP 管依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 樣本 80 80 試劑一 80 蒸餾水 80 試劑二 80 80 混勻,于 30℃孵育 30min 試劑四 160 160 立即混勻,室溫 12000rpm,離心 5min,上清液待測本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 顯色反應(yīng):于 EP 管依次加入: 上清液 100 100 試劑四 60 60 試劑五 200 200 試劑六 400 400 混勻,沸水?。?/span>95-100℃10min,冰浴至室溫,呈現(xiàn)藍(lán)綠色顏 色,全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,于 645nm 處讀取各管 A 值,A=A 對照-A 測定(每個樣本需做一個自身對照)【注】若ΔA 值在零附近,可增加樣本質(zhì)量 W(如增至 0.2g),或延長 30℃孵育時間 T(如增 1h 或更長),或加大樣本量 V1(如增至 1500μL,則試劑四相應(yīng)減少),則改變后的 W T V1 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.8609x - 0.0032,x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值ΔA。 2、按樣本蛋白濃度計算: 單位定義:每毫克組織蛋白每小時消耗 1mg GABA 定義為一個酶活力單位。 GABA-T 活力(mg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0032)÷0.8609]×V2÷(V1×Cpr)÷T =11.62×(ΔA+0.0032)÷Cpr 3、按樣本鮮重計算: 單位定義:每克組織每小時消耗 1mg GABA 定義為一個酶活力單位。 GABA-T 活力(mg/h/g 鮮重)=[(ΔA+0.0032 ÷0.8609]×V2÷(W×V1÷V)÷T =11.62×(ΔA+0.0032)÷W 4、按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算: 單位定義:每 104個細(xì)胞每小時消耗 1mg GABA 定義為一個酶活單位。 GABA-T 活力(mg/h/104 cell)=[(ΔA+0.0032)÷0.8609]×V2÷(500×V1÷V)÷T =0.03×(ΔA+0.0032) 5、按照液體體積計算: 單位定義:每毫升液體每小時消耗 1mg GABA 定義為一個酶活力單位。 GABA-T 活力(mg/h/mL)=[(ΔA+0.0032)÷0.8609]×V2÷V1÷T=11.62×(ΔA+0.0032) V---提取液體積,1mLV1---加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.08mL; V2---反應(yīng)體系總體積:0.4mL; T---反應(yīng)時間,30min=0.5h; W---樣本質(zhì)量,gCpr----樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 標(biāo)準(zhǔn)品母液(2mg/ml):標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 1mL 蒸餾水溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/ml。也可根據(jù)實 際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 按照顯色反應(yīng)階段的測定管加樣體系操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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