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上海宇淳生物科技有限公司

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花青素還原酶(ANR)試劑盒
花青素還原酶(ANR)試劑盒
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【簡單介紹】
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花青素還原酶(ANR)試劑盒
花青素還原酶(ANR)參與調(diào)控花青素的含量水平以及原花青素的形成,是原花青素單體生物合成過程中關(guān)鍵酶之一,在花青素積累過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。

花青素還原酶(ANR)試劑盒

花青素還原酶(ANR)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 花青素還原酶(anthocyanidin reductaseANR)試劑盒說明書 (貨號:WS6001F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 花青素還原酶(ANR)參與調(diào)控花青素的含量水平以及原花青素的形成,是原花青素 單體生物合成過程中關(guān)鍵酶之一,在花青素積累過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。 花青素還原酶(ANR)在NADPH存在下使飛燕草色素轉(zhuǎn)變?yōu)楸頉]食子兒茶素和NADP+, 通過檢測反應(yīng)體系在 340nm 處的吸光值下降速率即可得出花青素還原酶(ANR)活性大小。 二、試劑盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部,再 1.2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 粉劑 mg×2 -20℃保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部,每 支分別加 0.6mL 蒸餾水溶解備用。用不 完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù) 凍融,三天內(nèi)用完。 試劑三 液體 50mL×1 4℃保存 試劑四 粉劑μg×1 -20℃避光 保存 用前甩幾下或離心使粉劑落入底部,再 1.1mL 乙醇溶解備用,用不完的試劑 分裝后-20℃避光保存,禁止反復(fù)凍融。 三、所需的儀器和用品: 紫外分光光度計、1mL 石英比色皿(光徑 1cm)、無水乙醇、臺式離心機、水浴鍋、 可調(diào)式移液器、研缽、冰。 四、花青素還原酶(ANR)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿,12000rpm,4℃離心 10min, 取上清置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取。 ② 液體樣本:若液體澄清可直接檢測;若渾濁則 12000rpm,4℃離心 10min,取上 清置冰上待測。 2、上機檢測1 紫外分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。 2 所有試劑解凍至室溫(25℃)。 3 1mL 石英比色皿(光徑 1cm)中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 樣本 60 試劑一 20 試劑二 20 試劑三 600 340nm,室溫(25℃)孵育 5min本試劑盒僅供科研使用 2 試劑四 20 充分混勻,立即于 340nm 處讀取吸光值 A1,后于 40℃溫育 20min 后,再讀取吸光值 A2,△A=A1-A2。 【注】 1.若ΔA 的值在零附近徘徊,可增加樣本加樣量 V1(如增至 100μL,則試劑三減少至 560μL), 則改變后的 V1 需代入計算公式重新計算。 2.若起始值 A1 太大如超過 2(如顏色較深的組織樣本,一般色素較高,則起始值相對會偏高), 可以適當減少樣本加樣量 V1(如減至 40μL),則改變后的 V1 需代入計算公式重新計算。 3.若ΔA 的值大于 0.2,則需減少反應(yīng)時間(如 40℃溫育 20min 減少至 10min),則改變后的 反應(yīng)時間 T 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、按樣本蛋白濃度計算 酶活定義:40℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個酶活單位。 ANR 活性(nmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T =96.5×ΔA÷Cpr 2、按樣本鮮重計算 酶活定義:40℃條件下,每克組織每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個酶活單位。 ANR 活性(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V) ÷T =96.5×ΔA÷W 3、按液體體積計算 酶活定義:40℃條件下,每毫升液體每分鐘氧化 1nmolNADPH 定義為一個酶活單位。 ANR 活性(nmol/min/mL=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷V1÷T =96.5×ΔA V---加入提取液體積,1 mLV1---加入樣本體積,0.06mLV2---反應(yīng)體系總體積,7.2×10-4 L; d---光徑,1cm; ε---NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm; W---樣本質(zhì)量,g; T---反應(yīng)時間,20min; Cpr---蛋白濃度(mg/mL),建議使用本公司的 BCA 蛋白含量測定試劑盒。




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