| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥1010 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1010元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-24 15:38:55瀏覽次數(shù)：220
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線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶活性試劑盒
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶活性試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mt-GPD）活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS7190F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mt-GPD）存在于線粒體中，在 3-磷酸甘油途徑中起重要 作用，催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羥丙酮，同時生成的電子和氫進(jìn)入呼吸鏈參與氧 化磷酸化；在電子傳遞體（PMS）存在下，使噻唑藍(lán)（MTT）還原生成藍(lán)色產(chǎn)物，通過 檢測該藍(lán)色產(chǎn)物在 550nm 處的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑三 液體 0.5mL×1 支 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底 部，每支加 1.2mL 的蒸餾 水溶解。一周內(nèi)用完。 試劑二 粉劑 mg×4 支 -20℃保存 用前甩幾下使試劑落入底 部，每支加 0.6mL 的蒸餾 水溶解。一天內(nèi)用完。 試劑三 液體 35mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×1 支 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底 部，臨用前加 4.4mL 蒸餾 水溶解。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、石英比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)試移液器、臺式離心機(jī)、水浴鍋、研缽、 冰和蒸餾水。 四、線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mtGPD）活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、線粒體制備（提示：整個線粒體的提取過程須保持 4℃低溫環(huán)境）： ① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)菌/細(xì)胞，加入 1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻 漿，轉(zhuǎn)移至離心管后于 4℃×700g 離心 10min。 ② 棄沉淀，上清液移至另一離心管中，4℃×12000g 離心 10min。用移液器移除上清液(上 清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的酶活性（此步可選做）)，留下沉淀 （沉淀即為線粒體）。 ③ 在沉淀（線粒體）中加入200μL試劑二和2μL試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或 200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），液體置于冰上用于線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶 （mtGPD）活性測定。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取，或按照 細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 550nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入下列試劑：本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱（μL） 測定管 樣本 80 試劑一 40 試劑二 40 試劑三 600 試劑四 40 混勻后立即在 550nm 處讀取 A1 值，5min 后讀取 A2。 ΔA=A2-A1。 【注】：加完試劑四即啟動反應(yīng)，所以試劑四加完需立即檢測，若ΔA 小于 0.05，則 增加樣本上樣量 V1，試劑三相應(yīng)減少保持原體系不變（如樣本上樣量為 160μL 時，試劑三為 520μL）。則改變后的 V1 需帶入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算： 1、 按樣本蛋白濃度計算 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個酶活性單位。 mtGPD 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T=247×ΔA÷Cpr 2、 按樣本鮮重計算 酶活定義：每克組織每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個酶活性單位。 mtGPD 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W×V1÷V)÷T=49.9×ΔA÷W 3、 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算 酶活定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘還原 1 nmol 噻唑藍(lán)（MTT）定義為一個酶活單位。 mtGPD 活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.1×ΔA ε---還原型 MTT 的摩爾消光系數(shù)，8.1×103 L/mol/cm； d---比色皿光徑，1cm； V---加入提取液體積，0.202mL； V1---加入樣本體積，0.08mL； V2---反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L； T---反應(yīng)時間，5min； W---樣本質(zhì)量，g； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。
