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植物硝態(tài)氮/硝酸鹽含量試劑盒

植物硝態(tài)氮/硝酸鹽含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 植物硝態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書(shū) （貨號(hào)：WS9040F 分光法 48 樣） 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應(yīng)情況， 可作為土壤氮肥的指標(biāo)。測(cè)定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營(yíng)養(yǎng) 情況，而且對(duì)鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。 在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在強(qiáng)堿條件下呈黃 色，該黃色物質(zhì)在 410nm 處有光吸收，通過(guò)比色測(cè)定進(jìn)而計(jì)算得植物硝態(tài)氮含量。 二、試劑盒的組成和配制： 【注】：粉劑量在 mg 級(jí)別，使用前用手甩幾次或者進(jìn)行離心，打開(kāi)直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 的玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可 調(diào)式移液器、濃硫酸。 四、植物硝態(tài)氮含量測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱(chēng)取約 0.1g，加入 1mL 蒸餾水，室溫勻漿后，置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷 晃動(dòng)），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min，取上清待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌/細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 蒸餾水； 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷晃動(dòng)），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min， 取上清待測(cè)。 [注]:若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 410nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 空白管（僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 試劑一 40 40 室溫(25℃)反應(yīng) 10min 試劑名稱(chēng) 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑×2 支 4℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底部，每 支再加 1.5mL 濃硫酸充分溶解，4℃避光保存 1 周。 試劑二 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 自備 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 (沿著管壁務(wù)必緩慢加入) 950 950 混勻，取 0.8mL 于 1mL 的玻璃比色皿中，410nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測(cè)定管-A 空白管。 【注】試劑一和試劑二含有強(qiáng)酸強(qiáng)堿物質(zhì)，需做好實(shí)驗(yàn)防護(hù)措施，謹(jǐn)慎操作！ 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.6716x - 0.0005；x 為標(biāo)準(zhǔn)品（μg），y 為吸光值△A。 2、按樣本質(zhì)量計(jì)算： 硝態(tài)氮(NO3 -N)含量(μg/g 鮮重)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(W×V1÷V) =148.9×(△A+0.0005)÷W 3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算： 硝態(tài)氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(500×V1÷V) =0.298×(△A+0.0005) 4、按照液體體積計(jì)算： 硝態(tài)氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL) =[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷V1=148.9×(△A+0.0005) V---加入提取液體積，1mL； V1---樣本的加樣體積，10μL =0.01mL； 500---細(xì)胞數(shù)量，百萬(wàn)； W---樣本質(zhì)量，g。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過(guò)程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（500μg /mL）：稱(chēng)量 3.61mg 的硝酸鉀入 EP 管中，再加 1mL 蒸餾水 充分溶解（母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根據(jù)實(shí) 際樣本來(lái)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測(cè)定管的加樣順序操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。