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土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶(SαAfa)試劑盒
土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶(SαAfa)試劑盒
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【簡單介紹】
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土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶(SαAfa)試劑盒
土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa,EC 3.2.1.55)是一種能夠水解非還原呋喃阿拉伯糖殘基的糖苷酶類。

土壤αL阿拉伯呋喃糖苷酶(SαAfa)試劑盒

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本試劑盒僅供科研使用 1 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性測定試劑盒說明書 (貨號:WS5430F 分光法 24 ) 一、產(chǎn)品簡介: 土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa,EC 3.2.1.55)是一種能夠水解非還原呋喃阿拉 伯糖殘基的糖苷酶類。 本試劑盒提供一種簡單,靈敏,快速的測定方法,S-α-Afa分解對-硝基苯阿拉伯呋喃 糖苷生成對-硝基*酚(PNP),后者在405nm有吸收峰,通過測定吸光值升高速率即 可得出α-Afa酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 30mL×1 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部,再 15mL 試劑一,充分溶解備用。 試劑三 液體 15mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、臺式離心機、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、 可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(S-α-Afa)活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: 取新鮮土樣或者 37 度烘箱風(fēng)干(需先粗研磨),過 40 目篩網(wǎng),備用。 2、上機檢測① 可見分光光度計預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 405 nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 在離心管中依次加入下列試劑: 【注】:1. A 測定超過 1.8,可對最后一步的待檢測上清液(測定管和對照管)同時進(jìn)行稀釋(用水稀釋即 可),稀釋倍數(shù) D 代入計算公式; 2.ΔA 過小,可以增加土樣量或延長保溫時間(如:2h 或更長),重新調(diào)整的樣本量 W 和反應(yīng) 時間 T 需代入計算公式重新計算。 試劑名稱(μL測定管 對照管 土壤(g0.1g 0.1g 試劑一 500 試劑二 500 迅速混勻,37℃保溫 1h(間隔 15min 振蕩混勻一次) 試劑三 300 300 混勻,12000rpm,離心 5min,取出全部上清液至 1mL 璃比色皿(光徑 1cm)中,立即405nm 下讀取吸光值 AA= A 測定- A 對照(每個樣本需做一個自身對照)。本試劑盒僅供科研使用 2 3. 若同時檢測同一背景下的土壤樣本,此批土壤樣本可做一個樣本自身對照,節(jié)省時間;若是不 同背景下的土壤樣本(如黑土,紅土,黃土等),則每個樣本需做一個自身對照,即按照說 明書加樣表操作即可, 五、結(jié)果計算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1283x + 0.001;x 是標(biāo)準(zhǔn)品 PNP 質(zhì)量(μg), y A。 2、活性定義:在 37℃,每小時每克土壤產(chǎn)生 1μg -硝基*酚(PNP)定義為 1 個酶活單位。 S-α-Afa(μg/h/g 土樣)=[(A-0.001)÷0.1283]÷W÷T×D=7.8×(A-0.001)÷W×D W---土壤樣品質(zhì)量,g; D---稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1; T---催化反應(yīng)時間,1 h; PNP 相對分子質(zhì)量---139.11。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水溶解,若有結(jié)晶 析出,需 37℃水浴至*全溶解。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可根據(jù)實際 樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 EP 管中直接加入:10μL 標(biāo)準(zhǔn)品+490μL 試劑一+300μL 試劑三,混勻,全部上清 液轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)中,立即于 405nm 下讀取吸光值 A4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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