| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價 | ￥810 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 810元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-22 16:45:49瀏覽次數(shù)：240
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淀粉磷酸化酶試劑盒
淀粉磷酸化酶試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉磷酸化酶活性測定說明書 （貨號：WS0750F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 淀粉磷酸化酶是植物組織中降解淀粉的關(guān)鍵酶之一, 采用無機磷比色法測定淀粉 磷酸化酶活性。 二、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、 研缽、冰和蒸餾水。 三、試劑盒的組成和配制： 【注】：全程操作需無磷環(huán)境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，避 免磷污染。 四、淀粉磷酸化酶活性檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實 驗樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 700nm，所有試劑解凍至室溫（25℃）。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 提取液 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩下使粉體落入底部，再加 12mL 提取液后于 80℃水浴溶解 試劑二 粉體 mg×1 瓶 -20℃保存 臨用前甩下使粉體落入底部，再加 12mL 蒸餾水溶解 試劑三 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 A:粉體 mg×1 瓶 B:液體 3mL×1 瓶 4℃保存 臨用前加 2.9mL 的 B 液，再加 37.1mL 的蒸餾水，混勻溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 試劑一 200 200 樣本 150 試劑二 200 200 混勻，37℃孵育 20min 試劑三 200 200 樣本 150 混勻，12000rpm，4℃離心 5min，上清液待測本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 顯色反應(yīng)： 上清液 150 150 試劑四 600 600 混勻，室溫靜置 3min，700nm 下讀取各管吸光值， △A=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照）。 五、結(jié)果計算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.8474x - 0.0164，x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量（μmol/mL）, y 是△A。 2、按蛋白濃度計算： 定義：每小時每毫克組織蛋白分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。 酶活力(μmol/h/mg prot)= [(△A+0.0164)÷0.8474×V2] ÷（V1×Cpr）÷T =17.7×(△A+0.0164)÷Cpr 3、按樣本鮮重計算： 定義：每小時每克組織分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。 酶活力(μmol/h/g 鮮重)= [(△A+0.0164)÷0.8474×V2]÷(W× V1÷V)÷T =17.7×(△A+0.0164)÷W V---加入提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.15mL ； V2---酶促反應(yīng)總體積，0.75mL； T---反應(yīng)時間，1/3 小時； W---樣本鮮重，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（5μmol/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品用 10mL 試劑一溶解。（母液需在兩天內(nèi)用）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根據(jù)實際樣本來調(diào)整 標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)顯色反應(yīng)階段測定管的加樣體系操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
