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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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競爭法ELISA計(jì)算方法介紹
2024-5-13 閱讀(67)
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)最為敏感。
競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
1. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對(duì)照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。
測(cè)得A值后，先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均值（NCX）和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個(gè)特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算×NCX；如有2個(gè)陰性對(duì)照A超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A＞陽性判定值的反應(yīng)為陰性。
2. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，按下式計(jì)算：
抑制率（%）= ELISA試劑盒（陰性對(duì)照A值-標(biāo)本A值）×100%/陰性對(duì)照A值，一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
