核糖體是多肽鏈合成的主要場(chǎng)所，在大亞基和小亞基的交界面形成了3個(gè)tRNA結(jié)合位點(diǎn)，分別為A、P和E位點(diǎn)。A位點(diǎn)是氨基酰tRNA的結(jié)合位點(diǎn)，P位點(diǎn)是肽基酰tRNA的結(jié)合位點(diǎn)，E位點(diǎn)是脫氨基酸后的空載tRNA從核糖體上釋放前的臨時(shí)結(jié)合位點(diǎn)。一旦核糖體和負(fù)載的起始tRNA組裝于P位點(diǎn)上．多肽鏈的合成就開(kāi)始了，多肽鏈上每增加一個(gè)氨基酸都需要經(jīng)過(guò)進(jìn)位、成肽和移位三個(gè)步驟。與翻譯的起始不同，延伸的機(jī)制在原核堆物和直核阜物之間是高度保守和相似的。ELISA試劑盒

(1)進(jìn)位(entrance) 在密碼子篚指導(dǎo)下，正確的氨基酸t(yī)RNA結(jié)合到核糨核蛋白體的A位，稱為進(jìn)位。被稱為裁不穩(wěn)定的EF(EF—Tu)的延長(zhǎng)因子首憑與GTP結(jié)合，再與氨基酰tRNA結(jié)合威三元復(fù)合物，這樣的三元復(fù)合物才能進(jìn)^入A位。氨基酰tRNA在A位和正確的霍碼子配對(duì)后，EF—Tu和GDP從這個(gè)復(fù)臺(tái)物中解離下來(lái)。

(2)成肽(peptide bond formation)在原核生物的70S起始復(fù)合物和真核生物的80S起始復(fù)合體形成過(guò)程中，核糖核蛋白體的P位上已結(jié)合了起始型的氨基酰tRNA，當(dāng)進(jìn)位后，P位和A位上各結(jié)合了一個(gè)氨基酰tRNA，兩個(gè)氨基酸之間在核糖體轉(zhuǎn)肽酶作用下，P位上的氨基酸提供a-COOH基，與A位上的氨基酸的a-NH 2形成肽鍵，從而使P位上的氨基酸連接到A位氨基酸的氨基上，這就是成啦。這樣就在A位上形成了一個(gè)二肽酰tRNA。

(3)移位(translocation) 成肽作用發(fā)生后，P位點(diǎn)的tRNA就被脫去氨基，肽鏈則連接到A位的tRNA上。要使肽鏈延伸的新一輪循環(huán)得以發(fā)生，P位點(diǎn)的tRNA必須移至E位點(diǎn)，而A位點(diǎn)的tRNA必須移至P位點(diǎn)。同時(shí)mRNA也必須移動(dòng)3個(gè)核苷酸，以使下一個(gè)密碼子暴露出來(lái)，這一過(guò)程稱為移位。移位使礙核糖核蛋白體沿著mRNA向3 ˊ端方向移動(dòng)一組密碼子，原來(lái)結(jié)合二肽酰tRNA的A位轉(zhuǎn)變成了P位，而A位空出，可以接受下一個(gè)新的氨基酰tRNA進(jìn)入，而脫?；膖RNA從起始的P位點(diǎn)經(jīng)E位點(diǎn)被釋放到胞質(zhì)中。移位過(guò)程需要延伸因子EF-G與A位點(diǎn)的tRNA結(jié)合來(lái)驅(qū)動(dòng)其轉(zhuǎn)移至P位點(diǎn)，同時(shí)mRNA鏈也被原A位點(diǎn)的二肽酰tRNA拉著移動(dòng)實(shí)現(xiàn)了密碼子的移位。

    肽鏈上每增加一個(gè)氨基酸殘基，即重復(fù)上述進(jìn)位、轉(zhuǎn)肽、移位的步驟，直至所需的長(zhǎng)度，實(shí)驗(yàn)證明mRNA上的信息閱讀是從5ˊ端向3ˊ端進(jìn)行，而肽鏈的延伸是從氨基端到羧基端。所以多肽鏈合成的方向是N端到C端。ELISA試劑盒

2.翻譯的終止

    無(wú)論原核生物還是真核生物，沒(méi)有一個(gè)tRNA能夠與終止密碼子作用。在翻譯進(jìn)行到終止密碼子處，一類特殊的蛋白質(zhì)因子使翻譯終止，這類蛋白質(zhì)因子叫做釋放因子。釋放因子有I類釋放因子和Ⅱ類釋放因子兩類。I類釋放因子識(shí)別終止密碼子，并催化多肽鏈從P位點(diǎn)的tRNA中水解釋放出來(lái)。這類釋放因子在原核生物有兩種：RF1和RF2。RF1識(shí)別UAA和UAG，RF2識(shí)別UAA和UGA。真核生物中只有一種這類釋放因子eRF1。翻譯的終止過(guò)程。Ⅱ類釋放因子在多肽鏈釋放后刺激I類釋放因子從核糖體中解離出來(lái)。原核生物和真核生物細(xì)胞中都只有一種這類釋放因子，分別是：RF3和eRF3。具體來(lái)說(shuō)，I類釋放因子識(shí)別終止密碼子后作用于A位點(diǎn)，使轉(zhuǎn)肽酶活性變?yōu)樗饷富钚?，將肽鏈從結(jié)合在核糖體上的tRNA的CCA末端上水解下來(lái)。一旦I類釋放因子啟動(dòng)了肽基酰tRNA的水解，Ⅱ類釋放因子很快與核糖體結(jié)合使得I類釋放因子從核糖體上面解離下來(lái)。由于Ⅱ類釋放因子與核糖體的親和力較弱，I類釋放因子從核糖體釋放出來(lái)后它也很快從核糖體上解離下來(lái)。

    在多肽鏈和釋放因子離開(kāi)核糖體后，核糖體仍然結(jié)合在mRlNA上，并留下兩個(gè)空載的tRNA(在P位點(diǎn)和E位點(diǎn))。為了參與新一輪的多肽合成，tRNA和mRNA必須離開(kāi)核糖體，同時(shí)核糖體也必須分解為大、小亞基。這幾個(gè)事件統(tǒng)稱為核糖體循環(huán)(ribosome recycling)?，F(xiàn)在了解zui清楚的是原核生物的核糖體循環(huán)的機(jī)理：一種稱為核糖體循環(huán)因子(ribosorne recycling factor，．RRF)的蛋白質(zhì)與空位的A位點(diǎn)結(jié)合，隨后延伸因子EF—G也結(jié)合在A位點(diǎn)從而刺激結(jié)合于P位點(diǎn)和E位點(diǎn)的空載tRNA釋放出來(lái)。一旦tRNA從核糖體中脫離，EF—G和RRF同mRNA一起也從核糖體中釋放出來(lái)。zui后，起始因子IF3與核糖體小亞基結(jié)合，促進(jìn)大亞基游離出去，從而實(shí)現(xiàn)了核糖體大、小亞基的分離。解離后的大小亞基又重新參加新的肽鏈的合成。

3．蛋白質(zhì)翻譯后加工修飾

    從核糖體上釋放出來(lái)的多肽需要進(jìn)一步加工修飾才能形成具有生物活性的蛋白質(zhì)。翻譯后的肽鏈加工包括肽鏈的氨基端和羧基端的修飾，某些氨基酸化學(xué)基團(tuán)的羥基化、磷酸化、乙?；⑻腔?。另外，有些基因的翻譯產(chǎn)物前體含有多種肽鏈，這些肽鏈問(wèn)彼此聚合形成具有生理功能的蛋白質(zhì)。ELISA試劑盒