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上海一研生物科技有限公司

烈性噬菌體與噬菌體的分離及效價測定

時間:2016-1-20閱讀:1865
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    噬菌體是一種專門寄生在微生物體內(nèi)的病毒,它的頭、尾外部都有由蛋白質(zhì)組成的外殼(頭膜和尾鞘),頭的內(nèi)部含有DNA。噬菌體的生活過程可分為對宿主的吸附、侵入、增殖、成熟和裂解五個階段。噬菌體分為烈性噬菌體(virulent phage)和溫和性噬菌體(tempe-rate phage)。烈性噬菌體侵入微生物細胞后引起細胞裂解,溫和性噬菌體感染微生物細胞后不引起細胞裂解。發(fā)酵工業(yè)受噬菌體感染,會使生產(chǎn)受到嚴(yán)重影響,特別是烈性噬菌體的感染,其后果是毀滅性的。為了防止噬菌體感染,除了要采取防治措施外,更重要的是要開展抗噬菌體菌株的選育。

(1)烈性噬菌體與噬菌體的分離及效價測定

    烈性噬菌體侵蝕宿主細胞后能在宿主內(nèi)大量繁殖,釋放出許多子代噬菌體,進而感染周要細胞,使其裂解死亡,這樣就會在固體培養(yǎng)基上形成一個肉眼可見的空斑,即噬菌斑。噬菌體種類不同,其形成的噬菌斑也不一樣。噬菌斑大小O.1~2.Om rn,形態(tài)有暈圈的,也有多重同心圓斑的,還有圓形或近似圓形的等。一般情況下,每種噬菌體所形成的噬菌斑的形態(tài)是相對穩(wěn)定的,但有時也隨著宿主生理狀態(tài)、菌齡和培養(yǎng)條件不同而變化。噬菌斑的這些形態(tài)特征可以作為噬菌體的鑒定指標(biāo).也可利用其對噬菌體進行純種分離計數(shù)。每毫升試樣中所含有的噬菌體的數(shù)量稱為效價。

①雙層瓊脂法雙層瓊脂法是檢查和分離噬菌體常用的方法.

②快速測定法將噬菌體和對數(shù)期敏感細胞懸浮液與含有O.5~0.8%瓊脂培養(yǎng)基混合,加到無菌載玻片上攤平凝固,經(jīng)培養(yǎng)后,在顯微鏡、解剖鏡或放大鏡下觀察噬菌斑并計數(shù)。

(2)溫和性噬菌體和溶源性細胞 溫和性噬菌體感染微生物細胞后,細胞不會被裂解,而且能繼續(xù)生長繁殖,噬菌體DNA整合到寄主染色體上,與寄主染色體一道復(fù)制,并隨著細胞繁殖傳遞到子代。被溫和性噬菌體寄生的細菌稱為溶源性細菌。

    侵入到細菌的溫和性噬菌體,其DNA整合在細菌的染色體上,不能成為原有的顆粒形態(tài).這種隱藏狀態(tài)的噬菌體稱為原噬菌體(prophage)。原噬菌體沒有感染力,但當(dāng)它離開溶源性細菌染色體后,就能在細胞內(nèi)進行自身復(fù)制而導(dǎo)致細菌裂解。

    在溶源性細菌的分裂過程中,有極少數(shù)溶源性細胞的原噬菌體脫離細菌染色體,進入營養(yǎng)期進行繁殖,引起細菌裂解,釋放成熟噬菌體。除了自發(fā)裂解外,還可以采用人工誘導(dǎo)的方法,如采用物理、化學(xué)誘變劑處理,誘導(dǎo)溶源性細胞釋放大量的噬菌體。

    在細胞繁殖過程中,溶源性細菌以偶然的機會也會失去原噬菌體而成為非溶源性細菌,這個過程稱為復(fù)愈。

    原噬菌體整合在細菌的染色體上,能賦予溶源性細菌一些明顯的特征,免疫性就是其中之一。溶源性細菌對同一類噬菌體具有免疫性,表現(xiàn)為釋放的成熟噬菌體,即使附著在溶源性細菌的細胞壁上,或者已經(jīng)侵染,但不能在細胞內(nèi)繁殖,這種現(xiàn)象稱為免疫性(immu ni—ty)。少數(shù)溶源性細菌由于在其染色體上整合了溫和性噬菌體的原噬菌體而使自己產(chǎn)生了除免疫性以外的新表型,這種現(xiàn)象稱為溶源轉(zhuǎn)變(lysogenic conversion)。

    溶源現(xiàn)象普遍存在于各種微生物中,在發(fā)酵生產(chǎn)中也不能忽視溫和噬菌體的感染,尤其在選育抗噬菌體菌株時,要區(qū)別真正抗性菌株和溶源性菌株。

    檢驗溶源菌的方法是將少量溶源性細菌與大量的敏感性指示菌相混合,加入到瓊脂培養(yǎng)基中倒平板。培養(yǎng)后,溶源性細菌長成菌落。由于溶源性細菌在分裂過程中有極少數(shù)個體會發(fā)生自發(fā)裂解,其釋放的噬菌體會不斷侵染溶源菌周圍的敏感菌,所以會形成一個個*有溶源性細菌的小菌落、四周有透明圈的特殊噬菌斑。

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