1. 抗原的制備：
標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇：所用的菌種傷寒桿菌H901和傷寒桿菌O901應(yīng)具有典型形狀菌落及生化反應(yīng)。在生理鹽水中不發(fā)生自身凝集，與特異血清有高度凝集者可作為菌種。
2. 血清菌液的制備
1) 原液制備：
1.H菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株接種于一般瓊脂的克氏瓶或大試管內(nèi) 37℃孵育18—24小時(shí)。肉眼查詢有無雜菌生長(zhǎng)，必要時(shí)作鏡檢。用無菌甲醛生理鹽水洗下菌苔，將洗下液體裝入無菌試管內(nèi)，置37℃恒溫箱18—24小時(shí)以滅菌。得到原液。用作無菌實(shí)驗(yàn)行將菌液接種于肉湯及瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)4天，無活菌生長(zhǎng)者才可運(yùn)用。
2.O菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株依上法培養(yǎng)后，用無菌0.5%石灰酸鹽水將菌苔洗下，洗液裝入無菌試管置于37℃溫箱中18—24小時(shí)滅菌得原液。經(jīng)查看無菌時(shí)可以運(yùn)用(如無傷寒桿菌O菌株也可用H菌株制備O抗原。即用0.5%石灰酸生理鹽水洗下H菌菌液置100℃水浴60分鐘，破壞其H抗原即為O菌液。
2) 運(yùn)用液的制備：
合格的原液用標(biāo)準(zhǔn)比濁管核算含菌落數(shù)目后，用生理鹽水稀釋至每毫升含菌10億。是為了運(yùn)用液參加適量甲醛使其為0.25%，制備好的原液及運(yùn)用液均保存在2—10℃冰箱中備用，有效期為1年。
3．血清免疫方法
1) 選擇體重2—3千克的健康雄兔2—3只，由耳靜脈采血1毫升，別離血清。與進(jìn)行免疫用的細(xì)菌做凝集實(shí)驗(yàn)，測(cè)定有無天然凝集素。如無或微量時(shí)，該動(dòng)物可用于免疫。
2) 將已稀釋的抗原按以下劑量及程序注入兔耳靜脈。
日期第1天第5天第10天第15天第20天
打針劑量0.5ml、1ml1、5ml、2ml、2.5ml
3) 末次打針后7天耳靜脈采血1毫升，別離血清。用上述菌液作試管凝集實(shí)驗(yàn)，滴定抗菌血清中抗體的效價(jià)，效價(jià)在1：2000以上可放血。若效價(jià)不高可再增量打針菌液1—2次，再行試血。試血合格可頸動(dòng)脈放血(方法見附錄)。別離血清，參加防腐劑(如萬分之一的硫化汞)放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>