ELISA抗原競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)樣品中sIL-2R含量

[ELISA抗原競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)樣品中sIL-2R含量] 實(shí)驗(yàn)試劑 1. FITC標(biāo)記的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原使用，而不作為熒光素標(biāo)記。2. 堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)3. 對(duì)硝基苯磷酶鹽底物液；用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：為封閉液點(diǎn)稀釋液5. 不同倍比稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品：以1 [sIL-2R含量 ELISA抗原競(jìng)爭(zhēng)法 抗體 包被 抗原]

實(shí)驗(yàn)試劑

1. FITC標(biāo)記的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC為異硫氰酸熒光素，這里僅作為半抗原使用，而不作為熒光素標(biāo)記。

2. 堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)

3. 對(duì)硝基苯磷酶鹽底物液；用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。

4. 1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：為封閉液點(diǎn)稀釋液

5. 不同倍比稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品：以1% BSA-PBS稀釋。

6. 洗滌液(0.05%Tween20-PBS)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

96孔酶標(biāo)板(聚苯乙烯板)，酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)465nm濾光片，刻度吸管，毛細(xì)吸管，加樣器(頭)，4℃冰箱

實(shí)驗(yàn)材料

1. 純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈，P55，CD25，Tac抗原)(40.000u/ml)

2. 待測(cè)sIL-2R樣品

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 以一定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標(biāo)板，100ul/孔，4℃過(guò)夜(16-72h)；

2. 棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，200ul/孔，置室溫2h；

3. 用洗滌液加滿各孔置3min，然后傾去，反復(fù)洗滌3次；

4. 分別加入不同稀釋度的sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品，50μl/孔；

5. 各孔均加入FITC標(biāo)記的IL-2R McAb，50μl/孔，充分混勻后置室溫2h；

6. 同上洗滌3次；

7. 各孔均加入堿性磷酶酶標(biāo)記的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h；

8. 同上洗滌3次；

9. 各孔均加入底物液，100μl/孔，置室溫15-30min；

10. 用酶標(biāo)儀以波長(zhǎng)405nm測(cè)各孔OD值。