小鼠免疫的程序

一、抗原的準(zhǔn)備
1、收到抗原時(shí)，首先要了解抗原的種類、性質(zhì)和濃度，以便采取不同的處理方法。
2、多肽抗原，一般分多肽—偶聯(lián)KLH和多肽—偶聯(lián)BSA（或GGG）或裸多肽三種。多肽—偶聯(lián)KLH一般用于免疫，而多肽—偶聯(lián)BSA或裸肽一般用于檢測(cè)，在免疫時(shí)注意區(qū)分使用。
3、分裝
（1）收到抗原后，應(yīng)及時(shí)按免疫需要分裝，避免反復(fù)凍融。
（2）如抗原是大腸桿菌重組蛋白，可能存在不溶性沉淀，分裝前，應(yīng)用超聲粉碎儀粉碎，要注意，在冰浴中進(jìn)行，超聲強(qiáng)度應(yīng)以溶液不產(chǎn)生泡沫的水平為準(zhǔn)，超聲強(qiáng)度過(guò)大，易產(chǎn)生泡沫導(dǎo)致蛋白變性，超聲強(qiáng)度太低效果不佳，每次2-3秒，重復(fù)3-4次，超聲完畢立即分裝。
（3）分裝管應(yīng)用不粘附蛋白的樣品管，要用二種不同顏色的標(biāo)簽明確區(qū)分免疫用抗原和檢測(cè)用抗原，并寫明分裝日期，抗原名，濃度和劑量。
A 免疫用抗原：一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1個(gè)分裝管，備做免疫用。另分裝2個(gè)100ug/1管，備做融合前加強(qiáng)免疫用，再分裝25ug/只/×5=125ug/1個(gè)分裝管，共分裝4-5管，備加強(qiáng)免疫用。
B 檢測(cè)用抗原：100ug/每管，分裝共3管。
C 分裝好的抗原除馬上免疫用管外，其余均裝入小塑料袋中，寫好抗原名標(biāo)簽，馬上存入-700C。剩余抗原交保管員存-700C，并填好交接班表格。

二、免疫程序
1、多肽類抗原（包括MAP型多肽），*次用福氏*佐劑，每只50-100ug ,腹腔注射，總劑量0.5ml/只，第二次起用福氏不*佐劑，劑量為25-50ug/0.5ml/只，間隔3周，第三次注射后10天測(cè)血（ELISA 法），如滴度未達(dá)到1:104, OD1.0以上，則繼續(xù)免疫，如ELISA已達(dá)滴度，則可取血清送WB或ICC檢測(cè)。
2、蛋白類抗原：所用抗原的劑量等與多肽類相同，但進(jìn)程有差異，免疫21天后，第二次免疫后，每次間隔為10天。

三、抗原的乳化
抗原乳化前，應(yīng)檢查抗原管有否顆粒狀沉淀，如有沉淀，應(yīng)超聲粉碎后，立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中（PBS應(yīng)為無(wú)菌液），每只小鼠腹腔注射總量0.5ml，用2-5ml注射器，取1.25ml含抗原的PBS，另一支注射器取（等體積）福氏*佐劑或不*佐劑，用不銹鋼連接接頭連接，反復(fù)推拉混合約10-30分鐘，平放靜置30分鐘，如水乳相不再分離，即可注射小鼠。