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質(zhì)粒酵母操作步驟

時(shí)間:2013-12-20閱讀:368
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在使用質(zhì)粒酵母的同時(shí)我們需要怎么做呢?森貝伽給您提供質(zhì)粒酵母是如何轉(zhuǎn)化的

試驗(yàn)試劑:
    PLATE溶液: iZN ;40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;Sigma P 3640);0.1mol/L 醋酸鋰 g;10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5);1 mmol/L EDTA;

實(shí)驗(yàn)步驟:
1、用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑2~3mm),轉(zhuǎn)移到1.5ml的無菌離心管中.
2、將10μl載體DNA(100μg)與10μl轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA混合,振蕩均勻.(若轉(zhuǎn)化DNA是用未經(jīng)RNA酶處理的“mini-prep DNA"方法制得,則不需加載體DNA).
3、加0.5ml PLATE溶液,振蕩.
4、置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,室溫培養(yǎng)4天.
5、置42℃下熱激15分鐘.
6、以8000~10000r/min離心10秒沉淀細(xì)胞,小心棄去上清液,將細(xì)胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水,使細(xì)胞懸浮均勻,再直接將混合液涂選擇平板.

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