在收集到生物材料之后，能即刻進(jìn)行 RNA 制備工作。若需暫時儲存， 則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。我們在制備 RNA 時，將儲 存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍 ， 以避免 RNase 的作用。

具體可分為以下幾個環(huán)節(jié)：

1. 提取組織 RNA 時，每50～100mg 組織用 1ml Trizol 試劑對組織進(jìn)行裂解；提取細(xì)胞 RNA 時，先離心沉淀細(xì)胞，每 5-10 ╳106 個細(xì)胞加 1ml Trizol 后，反 復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞；
2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol 裂解液轉(zhuǎn)入EP 管中,在室溫15~30C 下放置 5 分鐘 ；
3. 在上述 EP 管中，按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿，蓋上 EP
管蓋子，在手中用力震蕩 15 秒，在室溫下（15℃～30℃）放置 2～3 分鐘后，
12000g（2℃～8℃）離心 15 分鐘；
4. 取上層水相置于新 EP 管中,按照每 1ml TRIZOL 加 0.5ml 異丙醇的量加入異丙 醇，在室溫下（15℃～30℃）放置 10 分鐘,12000g（2℃～8℃）離心 10 分鐘 ；
5.棄上清 ，按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75% 乙醇進(jìn) 行洗滌，渦 旋混合，7500g（2℃～8℃）離心 5 分鐘，棄上清；
6. 讓沉淀的 RNA 在室溫下自然干燥；
7. 用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。

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