尿素酶 詳細(xì)資料：

概述　
　尿素酶是一種人和動(dòng)物胃腸道及泌尿道細(xì)菌感染中常見(jiàn)的酶，它既是人和動(dòng)物中某些致病菌的致病因子之一，又是某些氮源性*物轉(zhuǎn)化所必須具備的酶之一. 它是人類*獲得晶體并發(fā)現(xiàn)含有Ni離子的金屬酶〔7〕。 　　又名脲酶，詳見(jiàn)百科“脲酶”詞條。編輯本段的理化性狀　　Hp除有的一般理化性狀外，還有其*性. Hp分子量為550KDa左右，直徑13nm，等電點(diǎn)5.99±0.03，zui適溫度45℃，zui適pH 8.2. Km值0.3mmol/L±0.1mmol/L，在飽和條件下純化的活性為每毫克蛋白質(zhì)每分鐘水解1100μmol±?200μmol尿素，較低Km值有助于Hp的在尿素濃度較低的人胃環(huán)境中始終處于飽和狀態(tài)而發(fā)揮zui大的功能. Hp單體由A，B兩個(gè)亞單位組成，呈六聚體，A，B兩個(gè)亞單體的Mr分別為30000和64000左右，其比例為1∶1，而其他菌屬所含則有三個(gè)亞單位組成. Hp的量很大，占全菌蛋白的5%～10%. 一般為胞質(zhì)蛋白，而Hp具有大量高活性的胞外，Hp產(chǎn)生的活性相當(dāng)于奇異變形桿菌的2倍，陽(yáng)性腸道菌的7倍，故活性的測(cè)定可以作為Hp的快速診斷方法。編輯本段大豆粕中的測(cè)定：測(cè)定方法1
　　方法名稱：尿素— *紅法（美國(guó)大豆協(xié)會(huì)） 　　1 原理 　　活性是大豆餅粕類加工正確與否的標(biāo)志，它的活性的高低與大豆餅粕加工（熱）程度有直接關(guān)系，此方法是在指示劑*磺存在的條件下，按尿素轉(zhuǎn)變成氨的方法定性測(cè)定豆粕中的活性。 　　2 試劑 　?。?）0.1mol/L硫酸（將6ml濃硫酸緩緩注入1000ml水中） 　?。?）0.2mol/L氫氧化鈉：取0.8g氫氧化鈉加蒸餾水，溶解成100ml 　?。?）尿素— *紅（別名：酚磺肽、酚紅）試劑：將 1.2g*紅溶于30mL0.2mol/L氫氧化鈉溶液中，用蒸餾水稀釋至300mL；加入90g尿素并溶解之，用蒸餾水稀釋至 2L；加 70mL0.1mol/L硫酸；稀釋至3L。 　　注意：配好的溶液應(yīng)具有明亮的琥珀色，若溶液轉(zhuǎn)變成桔紅色時(shí)，應(yīng)滴加0.1mol/L硫酸，調(diào)至呈琥珀色，試劑在試驗(yàn)前配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。尿素—*紅試劑有效期僅90天。 　　3．測(cè)定方法 　　（1）取粉碎好的豆粕，均勻地平鋪于培養(yǎng)皿中（注意鋪薄薄一層）。 　　（2）用滴管吸取尿素— *紅試劑，小自心滴在被測(cè)定的樣品中，將培養(yǎng)皿中豆粕全部浸濕。 　?。?）放置5分鐘后觀察結(jié)果： 　　①?zèng)]有任何紅點(diǎn)出現(xiàn)，再放置25分鐘，若還無(wú)紅點(diǎn)出現(xiàn)，說(shuō)明沒(méi)有活性，是豆粕加工過(guò)熟了。 　　②有少數(shù)紅點(diǎn)，為少量活性，豆粕可用。 　?、鄱蛊杀砻嬗?5%的紅點(diǎn)覆蓋，有少量活性，可用。 　?、芏蛊杀砻娉霈F(xiàn)50%的紅點(diǎn)覆蓋，活性大，應(yīng)慎用。 　?、荻蛊杀砻娴?75%一*為紅點(diǎn)覆蓋，活性很高，說(shuō)明豆粕過(guò)生，無(wú)法使用。
測(cè)定方法2
　　名稱：酚紅指示劑 　　1、原理 　　酚紅指示劑在PH6.4—8.2時(shí)由黃變紅，大豆制品中所含的，在室溫下可將尿素水解，產(chǎn)生氨，釋放的氨可使酚紅指示劑變紅，根據(jù)變紅時(shí)間長(zhǎng)短來(lái)判斷活性大小。 　　2、儀器和試劑 　?。?） 粉碎裝置：粉碎時(shí)應(yīng)不產(chǎn)生強(qiáng)烈發(fā)熱（如研體球磨機(jī)） 　?。?） 天平：感量0.01g 　?。?） 試管：直徑1.8cm，長(zhǎng)15cm 　?。?） 尿素：分析純 　?。?） 酚紅：分析純、0.1%乙醇（20%）溶液 　　3、測(cè)定步驟 　　將試樣研細(xì)，稱取0.02g試樣,稱準(zhǔn)至0.01g重，轉(zhuǎn)入試管中，加入0.02g結(jié)晶尿素及兩滴酚紅指示劑，加20—30mL蒸餾水，搖動(dòng)10s鐘。觀察溶液顏色，并記下呈粉紅色的時(shí)間。 　　4、活性的測(cè)定結(jié)果表示： 　?。?）1分鐘內(nèi)呈粉紅色為活性很強(qiáng)。 　?。?）1—5分鐘內(nèi)呈粉紅色為活性強(qiáng)。 　?。?）5—15 分鐘內(nèi)呈粉紅色為有點(diǎn)活性。 　　（4）15—30分鐘內(nèi)呈粉紅色為沒(méi)有活性。 　　通常10分鐘以上不顯粉紅色或紅色的大豆制品，其活性即可認(rèn)為合格。

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